

版權說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內容提供方,若內容存在侵權,請進行舉報或認領
文檔簡介
1、目的:
最近的研究證實Tudor-SN蛋白在胞漿中的一些細胞器如內質網(wǎng),脂滴中被發(fā)現(xiàn),還有研究表明脂肪細胞穩(wěn)定性的維持需要Tudor-SN蛋白的參與,Tudor-SN蛋白在脂肪發(fā)生變性時會傾向于在LDL聚集,并且會影響磷脂蛋白的分泌。我們實驗室前期在穩(wěn)定敲低 Tudor-SN的MDA-MB-231細胞系表達譜芯片結果中顯示,眾多與脂肪細胞分化及成熟相關的基因在Tudor-SN的表達下調后也發(fā)生了較為顯著的上調或者下調。這一結果
2、提示我們Tudor-SN可能參與了脂肪細胞的分化,后期我們通過構建的Tudor-SN轉基因小鼠進行的研究結果顯示,Tudor-SN有可能通過影響脂肪細胞的分化進程進一步影響小鼠個體水平上胰島素敏感性的變化。本課題的主要目的是在現(xiàn)有研究的基礎上,探討Tudor-SN在脂肪細胞分化中的作用及其可能的機制,以及對小鼠代謝水平的影響。
方法:
將小鼠胚胎成纖維細胞(3T3-L1)過表達Tudor-SN或者通過轉染小干擾將其敲
3、低,然后給予胰島素、地塞米松、IBMX混合刺激,利用油紅染色確定Tudor-SN的表達差異是否會影響胞內脂滴的生成。利用 Tudor-SN knockout的MEF細胞對該結論進行進一步的認定。通過western-blot及Real-time PCR驗證Tudor-SN與PPARγ這一調控脂肪細胞分化的最為重要的轉錄因子在分化過程中翻譯水平及轉錄水平的差異;利用Co-IP和GST-pull down確定兩者是否結合以及結合的具體片段;利
4、用免疫熒光觀察在分化末期兩者的共定位情況。通過蟲熒光素酶報告基因以及染色質免疫共沉淀實驗確定在脂肪分化過程中 Tudor-SN參與的轉錄調控情況。為了確定Tudor-SN的缺失是否會影響組蛋白修飾情況的變化,我們通過western-blot檢測了正常MEF和Tudor-SN KO MEF在誘導分化過程中相關組蛋白去乙酰化酶的表達變化。我們構建了Tudor-SN轉基因(Tg)小鼠,與正常(WT)小鼠分別進行正常飲食與高脂飲食12周的喂養(yǎng),
5、檢測正常飲食與高脂飲食情況下兩種小鼠的體重差異以及肝臟和脂肪的重量差異。冰凍切片染色檢測肝臟的脂肪變性情況。利用血糖儀檢測高脂后WT和Tg小鼠空腹血糖的含量,糖原檢測試劑盒檢測高脂后肝臟糖原的含量。生化分析儀檢測血清中的AST和ALT指標。利用葡萄糖耐受實驗和胰島素耐受實驗反映高脂后WT和Tg小鼠胰島素的敏感性的狀況。western-blot檢測肝臟和脂肪組織以及原代肝細胞胰島素刺激后Akt的磷酸化水平,從而反映其組織的胰島素敏感性。<
6、br> 結果:
Tudor-SN蛋白與脂肪細胞分化呈正相關的關系,當在細胞內被敲除后脂肪細胞分化能夠完全被抑制。Tudor-SN與PPARγ在分化過程中蛋白水平與mRNA水平呈現(xiàn)出變化的一致性。Tudor-SN與PPARγ在細胞內相互結合,這種結合通過Tudor-SN的SN結構域完成,且在細胞內兩者存在共定位。Tudor-SN在原代前脂肪細胞中表達,且與PPARγ結合,但在成熟的原代脂肪細胞中不表達。Tudor-SN在脂肪細
7、胞分化過程中,其轉錄活性受到 CEBP/β的調控。Tudor-SN能夠結合到PPARγ的靶基因的PPRE區(qū),作為PPARγ的共激活因子激活下游基因的轉錄。Tudor-SN的缺失能夠招募更多的組蛋白去乙酰化酶,從而使組蛋白的乙?;浇档停瑢D錄起到抑制作用。Tudor-SN轉基因小鼠在高脂喂養(yǎng)的條件下體重明顯輕于野生型小鼠,表現(xiàn)出了外周脂肪重而肝臟重量輕的特點。且肝臟的脂肪變性要顯著輕于野生型小鼠。Tudor-SN轉基因小鼠相比于野生型
溫馨提示
- 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
- 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請聯(lián)系上傳者。文件的所有權益歸上傳用戶所有。
- 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁內容里面會有圖紙預覽,若沒有圖紙預覽就沒有圖紙。
- 4. 未經權益所有人同意不得將文件中的內容挪作商業(yè)或盈利用途。
- 5. 眾賞文庫僅提供信息存儲空間,僅對用戶上傳內容的表現(xiàn)方式做保護處理,對用戶上傳分享的文檔內容本身不做任何修改或編輯,并不能對任何下載內容負責。
- 6. 下載文件中如有侵權或不適當內容,請與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
- 7. 本站不保證下載資源的準確性、安全性和完整性, 同時也不承擔用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。
最新文檔
- Tudor-SN蛋白調控細胞內應激顆粒組裝的分子機制.pdf
- Tudor-SN蛋白參與細胞周期及細胞增殖調控的機制研究.pdf
- Tudor-SN蛋白磷酸化對其參與應激顆粒形成的機制研究.pdf
- 家蠶Tudor-SN基因的鑒定及功能分析.pdf
- 應激狀態(tài)下Tudor-SN蛋白的亞細胞定位與磷酸化分析.pdf
- 成人棕色脂肪對代謝的影響及棕色脂肪活性調控機制研究.pdf
- 2064.colxv對脂肪細胞分化和脂代謝的影響及其機制研究
- 花色苷對脂肪細胞脂肪酸代謝的影響及其機制探討.pdf
- 丙酮酸肌酸對肉雞脂肪代謝和蛋白質代謝的影響及其機制研究.pdf
- Cathepsin K對脂肪細胞分化的影響及其作用機制的研究.pdf
- 載脂蛋白A5對脂肪細胞甘油三酯代謝的影響及其機制探討.pdf
- 辛伐他汀對小鼠脂肪細胞糖代謝的影響及其機制的研究.pdf
- 低氧對LO2細胞脂肪代謝的影響及其可能機制.pdf
- 阿魏酸對肥胖小鼠脂肪代謝的影響及其機制研究.pdf
- GLP-1對脂肪細胞糖代謝的影響及其機制研究.pdf
- 色氨酸對鵝組織蛋白質代謝調控機制的影響.pdf
- 母豬日糧蛋白水平對仔豬脂肪沉積的影響及l(fā)eptin介導的脂肪代謝調控研究.pdf
- GLP-1對3Te-L1前脂肪細胞分化的影響及其調控機制研究.pdf
- Adiponectin AS lncRNA對前體脂肪細胞分化的作用及調控機制.pdf
- 小檗堿對脂肪細胞糖代謝的影響及其機制研究.pdf
評論
0/150
提交評論