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文檔簡介
1、目的:
通過對人神經母細胞瘤(NB)細胞系SMS-KCNR細胞的體外實驗,觀察小劑量阿糖胞苷(Ara-C)對SMS-KCNR細胞的形態(tài)、增殖、周期分布及與NB增殖分化密切相關的蛋白、基因(TrkA、MYCN)表達的影響,以探討小劑量Ara-C對NB細胞終末分化的誘導作用。
方法:
(1)MTS法檢測Ara-C對SMS-KCNR細胞增殖的影響,并獲得能誘導SMS-KCNR細胞分化的Ara-C的最佳濃度(20n
2、g/ml或30ng/ml)。(2)將培養(yǎng)24小時的SMS-KCNR細胞分成四組:A組(陰性對照組)、B組(Ara-C20ng/ml)、C組(Ara-C30ng/ml)和D組(全反式維甲酸ATRA1μmol/l作為陽性對照組),并進行加藥處理。(3)每日于倒置相差顯微鏡下觀察各組SMS-KCNR細胞的形態(tài)變化及增殖情況;采用流式細胞儀(FCM)檢測細胞周期分布;蛋白質印跡(Western Blot)、實時定量PCR(Real-Time P
3、CR)從蛋白及基因水平檢測TrkA、MYCN的表達。
結果:
(1)小劑量Ara-C(<50ng/ml)對SMS-KCNR細胞的增殖具有抑制作用,中大劑量Ara-C(≥50ng/ml)則有較明顯的細胞毒作用。(2)SMS-KCNR細胞經小劑量Ara-C及ATRA處理6天后出現了明顯的形態(tài)學改變,即胞體變小、變圓,突起增多,部分軸突延伸超過胞體2倍以上,甚至相互交織成網狀,與正常神經節(jié)細胞類似。(3)細胞周期檢測發(fā)現小
4、劑量Ara-C可將SMS-KCNR細胞阻滯于DNA復制期(S期),抑制了細胞的有絲分裂(G2/M期下降P<0.05)。(4)Western Blot及RT-PCR的檢測結果均顯示小劑量Ara-C能夠上調TrkA的表達(P<0.05),并下調MYCN的表達(P<0.05)。
結論:
小劑量Ara-C與ATRA一樣對SMS-KCNR細胞的生長具有抑制作用,使其形態(tài)、周期分布及TrkA、MYCN的表達水平更接近正常神經節(jié)細
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