TCONS_00023979在前列腺癌中的作用及其可能的調控機制的初步研究.pdf

1、目的：
　　1、利用高通量芯片技術獲得在前列腺癌（PCa）組織與癌旁正常組織中差異表達的長鏈非編碼RNA（lncRNAs）和mRNAs；
　　2、驗證TCONS_00023979及其臨近基因PML的差異表達情況，探索TCONS_00023979對臨近基因PML的調控作用；
　　3、探索TCONS_00023979對前列腺癌細胞的增殖、侵襲能力的影響。
　　方法：
　　1、進行高通量lncRNA及mRNA混合

2、基因芯片檢測并得到前列腺癌組織和癌旁正常組織的差異基因表達譜。
　　2、通過芯片結果、鄰近編碼基因信息分析以及相關文獻報道篩選出其中的lncRNA分子作為研究對象。
　　3、收集13例前列腺癌根治術的組織標本用qRT-PCR方法檢測TCONS_00023979及其鄰近基因PML在前列腺癌組織中的表達水平，并與芯片結果相比較。
　　4、構建TCONS_00023979特異性的siRNA序列，轉染入DU145和LNCaP等

3、前列腺癌細胞下調TCONS_00023979的表達水平，并通過qRT-PCR技術篩選出干擾效果最佳的siRNA序列。
　　5、利用qRT-PCR和westernbolt技術檢測TCONS_00023979表達被干擾后對PML的mRNA和蛋白質表達水平的影響，根據(jù)結果探討TCONS_00023979對PML的調控作用。
　　6、進行MTT、平板克隆以及Transwell等細胞生物學實驗檢測TCONS_00023979表達水平的

4、下調對前列腺癌細胞生長增殖、侵襲能力的影響。
　　結果：
　　1、高通量芯片分析結果顯示共有多個lncRNA以及mRNA分子差異性表達，最終依據(jù)基因注釋信息及相關文獻報道，獲得了9個mRNAs和相應的13個lncRNAs，其中包括PML和TCONS_00023979。
　　2、多步驟篩選結果提示TCONS_00023979可能是與前列腺癌相關的關鍵lncRNA分子之一，而且組織qRT-PCR驗證結果顯示：TCONS_0

5、0023979和PML在PCa組織中的表達水平均低于癌旁正常組織，與芯片結果保持一致。
　　3、下調TCONS_00023979的表達后進行qRT-PCR和westernblot技術檢測后發(fā)現(xiàn)PML的mRNA和蛋白質表達水平也明顯下調。
　　4、干擾TCONS_00023979的表達后可導致DU145、LNCaP等前列腺癌細胞的生長增殖、侵襲能力明顯增強。
　　結論：
　　1、通過高通量基因芯片篩選分析，我們新發(fā)