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文檔簡介
1、目的:本研究旨在探討類泛素折疊修飾蛋白Ufm1在人臍靜脈內(nèi)皮細胞炎癥反應中的表達及作用,并進一步探討其可能的分子機制。
方法:免疫熒光法觀察 Ufm1在內(nèi)皮細胞中的表達和定位。使用濃度為100ng/ml的脂多糖LPS體外處理人臍靜脈內(nèi)皮細胞系HUVECs,分別刺激0h、3h、6h、12h、24h、48h后,采用Real-Time PCR檢測炎性細胞因子(TNFα、IL-6、IL-1β、IL-12、MCP-1)和Ufm1的mRN
2、A水平,同時通過Western blotting檢測Ufm1蛋白水平的變化。另外,構建Ufm1過表達質(zhì)粒,轉(zhuǎn)染質(zhì)粒至HUVECs,經(jīng)LPS刺激3h后,采用Real-Time PCR檢測各組中上述炎性細胞因子的變化。Western blotting法檢測NF-κB的總蛋白表達量及其入核量,以探討Ufm1抑制HUVECs炎性細胞因子表達的可能分子機制。
結果:Ufm1蛋白在HUVECs的細胞核和細胞質(zhì)中均有表達。在LPS誘導HUV
3、ECs炎癥反應中,主要炎性細胞因子TNFα、IL-6、IL-1β、IL-12、MCP-1的mRNA水平隨著時間變化而升高,并且在刺激后3-6h達到高峰,且有統(tǒng)計學差異(p<0.05)。同時,Ufm1的 mRNA水平和蛋白表達量也隨著時間的變化而上調(diào),且具有時間依賴性。過表達Ufm1后,LPS誘導產(chǎn)生的相關炎性細胞因子表達量顯著降低。與對照組相比,Toll樣受體通路中NF-κB P65在LPS刺激后入核增多,但過表達Ufm1后p65入核減
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