PI3K-AKT信號(hào)通路在THP-1細(xì)胞中對(duì)NLRP3炎癥小體的調(diào)節(jié)作用.pdf

1、導(dǎo)引：
　　磷酸肌醇3-激酶/蛋白激酶B（PI3K/Akt）信號(hào)通路在動(dòng)脈粥樣硬化的調(diào)節(jié)中發(fā)揮關(guān)鍵作用。模式識(shí)別受體（PRR）中的Nod樣（NLR）家族成員的NLRP3激活是動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)病機(jī)理中的關(guān)鍵步驟。NLRP3激活導(dǎo)致胱天蛋白酶-1的成熟和IL-1β和IL-18的釋放。目前PI3K/Akt信號(hào)通路對(duì)NLRP3炎癥小體的調(diào)節(jié)機(jī)制，尚不完全清楚。本課題在人單核細(xì)胞THP-1中研究PI3K/Akt信號(hào)通路對(duì)NLRP3炎癥小體的

2、潛在調(diào)節(jié)作用。
　　方法：
　　本研究以人THP-1細(xì)胞作為單核巨噬細(xì)胞，分為7組:對(duì)照組，Ox-LDL組，PI3K抑制劑組，PI3K抑制劑+Ox-LDL組，Akt抑制劑組，Akt抑制劑+LDL組，PI3K抑制劑+Akt抑制劑+Ox-LDL組。在Ox-LDL（100μg/mL）處理24小時(shí)后，加入GDC0941（1μg/mL，PI3K抑制劑）或/和MK2206（1μg/mL，Akt抑制劑）。然后采用蛋白質(zhì)印跡法測(cè)定NLRP3

3、，caspase-1，IL-1β和IL-18的蛋白表達(dá)水平。
　　結(jié)果：
　　THP-1細(xì)胞中Ox-LDL劑量和時(shí)間依賴性激活NLRP3炎癥小體。劑量-反應(yīng)和時(shí)間-反應(yīng)實(shí)驗(yàn)顯示100μg/mL的Ox-LDL處理24小時(shí)時(shí)，NLRP3激活最為顯著。GDC0941和MK2206都可有效地抑制NLRP3活性，表現(xiàn)在NLRP3蛋白表達(dá)的抑制。GDC0941和MK2206也明顯地抑制NLRP3下游的caspase-1，IL-Iβ和IL