苦參堿對長春新堿誘導的神經病理性疼痛小鼠的鎮(zhèn)痛作用及其對Ras-Raf-ERK1-2信號通路的影響.pdf

1、目的：
　　觀察苦參堿（Matrine,MT）對長春新堿誘導的神經病理性疼痛小鼠的鎮(zhèn)痛作用，并研究Ras/Raf/ERK1/2信號通路對其鎮(zhèn)痛作用的影響。
　　方法：
　　1.行為藥理學方法采用機械刺痛法測定小鼠的機械縮足反射閾值；熱輻射刺激法測定小鼠的熱縮足反射潛伏期；冷板法測定小鼠的冷縮足反射次數；壓痛法測定小鼠的壓痛閾值。通過以上實驗，評價MT對長春新堿誘導的神經病理性疼痛的作用。
　　2.電生理實驗方法觀

2、察小鼠坐骨-腓神經動作電位，測定感覺神經動作電位振幅及神經傳導速度，觀察MT對長春新堿誘導的神經病理性疼痛的影響。
　　3.組織病理學實驗方法采用HE染色法觀察長春新堿誘導的神經病理性疼痛小鼠的坐骨神經、背根神經節(jié)以及脊髓背角的組織病理改變情況，進而評價MT對長春新堿誘導的神經病理性疼痛小鼠的神經保護作用。
　　4.免疫熒光標記技術測定MT對小鼠脊髓背角星型膠質細胞標記物GFAP以及p-ERK1/2的免疫熒光強度，分析脊髓星

3、型膠質細胞、p-ERK1/2與MT鎮(zhèn)痛作用的關系。
　　5.q-PCR方法檢測小鼠脊髓中Ras、c-Raf及ERK1/2 mRNA含量，分析脊髓中Ras、c-Raf及ERK1/2 mRNA的表達對MT鎮(zhèn)痛作用的影響。
　　6.Western blot方法檢測MT對小鼠脊髓背角Ras、c-Raf、p-c-Raf、ERK1/2、p-ERK1/2、TNF-α、IL-6以及IL-10蛋白含量的影響，分析脊髓Ras、c-Raf、p-c

4、-Raf、ERK1/2、p-ERK1/2、TNF-α、IL-6以及IL-10與 MT鎮(zhèn)痛作用的關系。
　　結果：
　　1.MT對長春新堿誘導的神經病理性疼痛的鎮(zhèn)痛作用
　　與VCR+NS組比較，腹腔注射 MT60mg/kg可顯著提高小鼠機械縮足反射閾值(p<0.01)；可延長小鼠熱縮足反射潛伏期(p<0.01)；可提高小鼠機械壓痛閾值(p<0.01)；可減少冷抬足次數（p<0.01）。
　　2.MT對坐骨神經電生

5、理活動的影響
　　與VCR+NS組比較，腹腔注射MT30、60mg/kg后可明顯提高小鼠感覺神經動作電位振幅（p<0.01），腹腔注射MT60mg/kg后可明顯加快感覺神經傳導速度（p<0.01）。
　　3.MT對坐骨神經、背根神經節(jié)以及脊髓背角病理變化的影響
　　與VCR+NS組比較，腹腔注射MT60mg/kg后可明顯恢復小鼠坐骨神經、背根神經節(jié)以及脊髓背角組織病理變化。
　　4.MT對小鼠脊髓背角GFAP免疫

6、熒光強度的影響
　　與VCR+NS組比較，腹腔注射MT60mg/kg可明顯降低小鼠脊髓背角GFAP免疫熒光強度(p<0.01)。
　　5.MT對小鼠脊髓TNF-α,IL-6及IL-10蛋白的影響
　　與VCR+NS組比較，腹腔注射MT60mg/kg可明顯降低小鼠脊髓TNF-α,IL-6蛋白表達，升高IL-10蛋白表達(p<0.01)。
　　6.MT對小鼠脊髓p-ERK1/2免疫熒光強度，Ras、c-Raf、p-c

7、-Raf、ERK1/2、p-ERK1/2蛋白含量及Ras、c-Raf、ERK1/2mRNA表達的影響
　　與VCR+NS組比較，腹腔注射MT60mg/kg可明顯降低小鼠脊髓背角p-ERK1/2免疫熒光強度(p<0.01)；同時可使小鼠脊髓Ras、p-c-Raf、p-ERK1/2蛋白含量及Ras、c-Raf、ERK1/2mRNA表達降低(p<0.01)，但對c-Raf、ERK1/2蛋白表達無明顯影響。
　　結論：
　　1