自噬在人肝癌細(xì)胞株HepG2-ADM對(duì)ADM耐藥中的作用研究.pdf

1、目的:通過(guò)應(yīng)用自噬抑制劑氯喹抑制自噬等方式，觀察人肝癌細(xì)胞株HepG2/ADM對(duì)阿霉素（ADM）耐藥性的變化，探討自噬在人肝癌細(xì)胞株HepG2/ADM對(duì)ADM耐藥中的作用，進(jìn)而了解自噬在肝細(xì)胞癌耐藥中的作用。
　　方法:體外培養(yǎng)人肝癌HepG2細(xì)胞株及其耐藥株人肝癌HepG2/ADM細(xì)胞株;CCK-8比色法檢測(cè)HepG2/ADM細(xì)胞株對(duì)ADM的耐藥性;MDC法觀察不同濃度ADM作用于HepG2/ADM細(xì)胞株后胞漿內(nèi)自噬小泡的分布情

2、況，WB法檢測(cè)不同濃度ADM作用于HepG2/ADM細(xì)胞株后LC3、P62的蛋白表達(dá)情況;CCK-8比色法檢測(cè)自噬抑制劑氯喹二磷酸鹽(CQ)對(duì)人肝癌耐藥細(xì)胞株HepG2/ADM的抑制作用;MDC法觀察ADM組、CQ組、CQ+ADM組作用于HepG2/ADM細(xì)胞株后胞漿內(nèi)自噬小泡的分布情況，Western Blot法檢測(cè)ADM組、CQ組、CQ+ADM組作用于HepG2/ADM細(xì)胞株后LC3、P62的蛋白表達(dá)情況;CCK-8法檢測(cè)抑制自噬前

3、后耐藥細(xì)胞株HepG2/ADM對(duì)ADM藥敏性的變化，觀察耐藥的逆轉(zhuǎn)效果;
　　結(jié)果:
　　1.ADM對(duì)HepG2的IC50為0.77±0.11mg/L，對(duì)HepG2/ADM細(xì)胞的IC50為5.01±1.43mg/L，HepG2/ADM對(duì)ADM的耐藥指數(shù)為6.51。
　　2.MDC法觀察到ADM作用于HepG2/ADM細(xì)胞株后胞漿出現(xiàn)自噬泡的堆積，LC3-Ⅱ表達(dá)比率隨ADM濃度升高而升高，P62表達(dá)比率隨ADM濃度升高而

4、降低。
　　3.選擇可有效抑制自噬流，濃度為10-50umol/ml的CQ溶液作用于HepG2/ADM細(xì)胞株，它的生長(zhǎng)抑制率全部小于10％，沒(méi)有明顯毒性作用。
　　4.MDC法觀察到ADM組、CQ組、ADM+CQ組細(xì)胞胞漿內(nèi)均出現(xiàn)自噬泡的堆積，以ADM+CQ組最為明顯，陰性對(duì)照組未見(jiàn)明顯自噬泡堆積現(xiàn)象。Western Blot法可檢測(cè)到:相較于陰性對(duì)照組，ADM組LC3-Ⅱ表達(dá)比率升高，P62表達(dá)降低，CQ組LC3-Ⅱ表達(dá)比

5、率升高，P62表達(dá)無(wú)明顯變化，CQ+ADM組LC3-Ⅱ表達(dá)比率明顯升高，P62表達(dá)較CQ單獨(dú)作用者稍低，較ADM單獨(dú)作用組稍高。
　　5.用CQ抑制自噬后，ADM對(duì)HepG2/ADM細(xì)胞株的IC50由ADM單獨(dú)作用的5.01±1.43mg/L降至2.83±0.14mg/L，逆轉(zhuǎn)倍數(shù)為1.77倍。
　　結(jié)論:
　　1.ADM作用于HepG2/ADM時(shí)，誘發(fā)了人肝癌耐藥細(xì)胞株HepG2/ADM的自噬。自噬水平隨ADM濃度的