吉非替尼在荷瘤裸鼠體內(nèi)的時辰藥動學及其機制.pdf

1、目的:
　　本研究通過建立Balb/c裸鼠皮下移植瘤模型，探究吉非替尼時辰給藥的藥動學特點，并從代謝酶、受體通路及時辰基因的角度探討其可能的機制。
　　方法:
　　1.裸鼠皮下移植瘤模型的建立與隨機分組：將Balb/c裸鼠置于嚴格的人工控制的12 h明期-12 h暗期（07:00開燈，19:00關燈)的條件下適應性飼養(yǎng)2周。于右上肢皮下接種HCC827細胞，建立裸鼠皮下移植瘤模型。將造模成功的裸鼠隨機分為08:00、1

2、2:00、16:00、20:00、24:00及次日04:00六個時辰組。每個時辰組又隨機分為給藥組和模型組，并將模型組隨機分為9個取血點組。另外，每個時辰點各隨機加入未種瘤的正常裸鼠作為對照組。
　　2.時辰給藥及血漿、肝組織樣本的獲取：給藥組裸鼠在相應時辰點給予1.0 mg·kg-1吉非替尼混懸液，并于給藥后0 h、15、30 min、1、3、5、7、9、16、24h摘眼球取血。將血液離心得到血漿并低溫保存。取血后立即脫臼處死裸

3、鼠，取肝組織冷凍保存。
　　3.血藥濃度檢測：采用高效液相色譜法聯(lián)合質譜（high-performance liquid chromatography coupled with tandem mass spectrometry，HPLC-MS/MS）的方法檢測各個時辰點吉非替尼的血藥濃度，并用WinNonlin6.3計算各時辰點的藥動學參數(shù)。
　　4.相關基因表達水平的檢測：采用實時熒光定量PCR（quantificatio

4、nal real time-polymerase chain reaction，qRT-PCR）檢測裸鼠肝組織中細胞色素P-450酶3a11（cytochrome P450 enzyme3a11，cyp3a11）、cyp3a13、孕烷X受體（pregnane X receptor，PXR）、組成型雄甾烷受體（constitutive androstane receptor，CAR）及相關時辰基因的表達。
　　結果:
　　1.

5、8:00給藥組吉非替尼的AUC(0-24h)明顯高于其他給藥組，清除率明顯高于其他各組。對于MRT(0-24h)，8:00、24:00、4:00給藥組之間沒有統(tǒng)計學差異，但均高于12:00、16:00、20:00給藥組（P<0.05）。16:00、20:00給藥組的AUC(0-24h)較低，其清除率較高（P<0.05）。
　　2.各時辰點模型組的cyp3a11、cyp3a13、PXR、CAR、Per1、Per2和Bmal1 mRN

6、A的表達具有晝夜節(jié)律性。cyp3a11、PXR和CAR mRNA在16:00到24:00之間表達較高，在20:00達到峰值，cyp3a13在16:00、20:00和24:00均有較高的表達（P<0.05）。Bmal1mRNA的表達在20:00時達到峰值，Per1、Per2在4:00表達較高（P<0.05）。給與吉非替尼后，20:00給藥組cyp3a11、PXR、CAR mRNA24 h的總體表達水平最高。12:00給藥組cyp3a13

7、mRNA24 h的總體表達水平最高。Bmal1 mRNA24 h的總體表達水平在20:00給藥組最高，這與代謝酶的表達趨勢相吻合。Per1 mRNA24 h的總體表達水平在24:00、4:00給藥組較高，在20:00給藥組最低。Per2 mRNA24 h的總體表達水平在8:00、12:00、24:00給藥組較高，這與代謝酶的表達相反，但與血藥濃度的變化相吻合。
　　結論:
　　吉非替尼在荷瘤裸鼠體內(nèi)的藥動學過程因給藥時間的不