烏司他丁對(duì)氧化損傷海馬神經(jīng)元線粒體膜電位及凋亡相關(guān)蛋白BCL-2、MCU的影響.pdf

1、中圖分類號(hào)：中圖分類號(hào)：R89；R36；R39碩士學(xué)位論文烏司他丁對(duì)氧化損傷海馬神經(jīng)元線粒體膜電位及凋亡相烏司他丁對(duì)氧化損傷海馬神經(jīng)元線粒體膜電位及凋亡相關(guān)蛋白關(guān)蛋白BCLBCL2、MCUMCU的影響的影響院（系）、所院（系）、所臨床醫(yī)學(xué)院研究生姓名研究生姓名王平學(xué)科、專學(xué)科、專業(yè)神經(jīng)病學(xué)導(dǎo)師姓導(dǎo)師姓名陳秀教授二〇一七年三〇一七年三月西南醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文烏司他丁對(duì)氧化損傷海馬神經(jīng)元線粒體膜電位及凋亡相關(guān)蛋白烏司他丁對(duì)氧化損傷海馬神經(jīng)

2、元線粒體膜電位及凋亡相關(guān)蛋白BCL2、MCU的影響的影響摘要目的：探討烏司他丁對(duì)氧化損傷海馬神經(jīng)元線粒體能量代謝、膜電位變化，以及凋亡相關(guān)蛋白B細(xì)胞淋巴瘤白血病2蛋白（BCL2）、線粒體鈣單向轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白（MCU）的影響和可能的機(jī)制。方法：分離SD胎鼠海馬，采用無(wú)血清培養(yǎng)原代海馬神經(jīng)元，取培養(yǎng)至第9天的神經(jīng)元，采用H2O2建立氧化應(yīng)激損傷模型，分為空白對(duì)照組（N），H2O2組（H），烏司他丁預(yù)處理1000umlH2O2組（UTI1H），烏司

3、他丁預(yù)處理2000umlH2O2組（UTI2H），倒置相差顯微鏡觀察神經(jīng)元形態(tài)的改變，酶標(biāo)儀檢測(cè)神經(jīng)元的NaKATP酶和Ca2Mg2ATP酶活性；熒光顯微鏡觀察JC1法檢測(cè)線粒體膜電位變化；AnnexinVFluesceinPI雙染法和Hoechst33342PI雙染法測(cè)神經(jīng)元凋亡率；采用RTPCR及Westernblot檢測(cè)BCL2、MCU蛋白的表達(dá)。結(jié)果：1、采用無(wú)血清培養(yǎng)原代海馬神經(jīng)元生長(zhǎng)良好，培養(yǎng)814天的神經(jīng)元長(zhǎng)勢(shì)最好，細(xì)胞核

4、立體感強(qiáng)，軸突聯(lián)接成網(wǎng)絡(luò)，神經(jīng)元純度為92.05%，滿足實(shí)驗(yàn)要求。2、各組形態(tài)改變，H組可見(jiàn)神經(jīng)元胞漿濃縮，細(xì)胞核邊集，胞間隙增大，軸突斷裂，少部分細(xì)胞懸浮。UTI1H和UTI2H組可見(jiàn)細(xì)胞保持完整形態(tài)，部份細(xì)胞皺縮，胞體有光暈。3、ATP酶的測(cè)定：與N組比較，H組NaKATP酶、Ca2Mg2ATP酶活性降低（P?0.05），與H組比較，UTI1H和UTI2H組NaKATP酶、Ca2Mg2ATP酶活性升高（P?0.05），UTI1H和U