丹參酮ⅡA通過調(diào)節(jié)ACE2-ANG(1-7)軸減輕博萊霉素導致的大鼠肺纖維化.pdf

1、研究背景：
　　特發(fā)性肺纖維化(Idiopathic pulmonary fibrosis IPF),其病變局限在肺臟,導致全肺彌漫性的纖維化,引起肺組織功能嚴重受損害及進行性加重的呼吸困難,最終導致呼吸循環(huán)衰竭。該病病因不明確,研究發(fā)現(xiàn)多種體液因素與細胞因素參與了肺纖維化的發(fā)生、發(fā)展過程,但具體機制尚未闡明。IPF最終導致進行性進展的肺組織功能損害及極度呼吸困難,且目前臨床對該病尚缺乏有效的治療手段,因此通常具有較高的病死率。I

2、PF的發(fā)病群體主要為成人、且隨著年齡增加而增高。但因反復發(fā)生的急性支氣管炎、各種腫瘤疾病、誤服農(nóng)藥等原因,使得該病在兒童這一低齡組的發(fā)病率逐年升高。IPF臨床常規(guī)的治療方法僅僅只能緩解病情,而達不到完全控制疾病進展并最終達到治愈。因此目前臨床研究的熱點及焦點集中在探尋肺纖維化的致病因素及其發(fā)病機制,尋找能夠抑制炎癥反應、阻止纖維化進程,從而進一步使得肺纖維化達到治愈的可能、且副作用低的有效方法。
　　丹參酮ⅡA是從丹參根部提取的脂

3、溶性物質(zhì),它的分子式為C18H12O3。其屬于二萜醌類化合物,具有抑菌作用、抗炎作用、類激素樣藥理作用,臨床多用于治療各種感染性疾病、心血管神經(jīng)系統(tǒng)疾病、皮膚疾病。目前尚不明確丹參酮對肺纖維化是否具有保護作用。
　　人體內(nèi)主要的體液調(diào)節(jié)系統(tǒng):腎素-血管緊張素-醛固酮系統(tǒng)(Renin-aldosterone-aldosterone system,RAAS),在肺纖維化的發(fā)生發(fā)展過程中起著至關(guān)重要的作用。血管緊張素轉(zhuǎn)化酶(Angiot

4、ensin converting enzyme,ACE)是RAAS系統(tǒng)的重要成員,可以水解血管緊張素Ⅰ(AngiotensinⅠ,AngⅠ)為血管緊張素Ⅱ(AngiotensinⅡ,AngⅡ),AngⅡ在各種炎癥的發(fā)生、發(fā)展過程中發(fā)揮著重要的作用。血管緊張素轉(zhuǎn)化酶2(Angiotensin converting enzyme2,ACE2)是RAAS系統(tǒng)的另一重要成員,它是ACE的同源物,但其作用與ACE又不同。ACE2可以使AngⅠ及A

5、ngⅡ水解而產(chǎn)生Ang(1-9)和Ang(1-7),從而使AngⅡ介導的炎癥反應減輕。本實驗擬觀察丹參酮ⅡA對肺纖維化具有的保護作用,并進一步深入研究其可能的作用機制,為其在肺纖維化的臨床應用提供理論依據(jù)。
　　實驗目的：
　　1.觀察丹參酮ⅡA對博萊霉素導致的肺纖維化的保護作用。
　　2.觀察丹參酮ⅡA是否通過ACE-2/ANG-(1-7)軸來減輕博萊霉素導致的肺纖維化。
　　實驗方法：
　　為觀察丹參酮

6、ⅡA對博萊霉素導致大鼠肺纖維化的影響,將雄性SD大鼠隨機分成對照組、博萊霉素組和博萊霉素+丹參酮IIA組共三組(n=10)。博萊霉素組經(jīng)氣管內(nèi)滴注博萊霉素(5 mg/kg,50μl)造成肺纖維化模型,博萊霉素+丹參酮IIA組在經(jīng)氣管內(nèi)滴注博萊霉素后1小時腹腔注射給予丹參酮IIA(25 mg/kg/day,共28天)。對照組氣管注入0.9％無菌生理鹽水(50μl)。肺系數(shù)分析:在第7天、14天、28天時間觀察點,將大鼠麻醉后切開胸骨取出肺

7、臟,將肺組織用濾紙清潔并計算出系數(shù)。肺組織學分析:將肺組織石蠟包埋后切成4μm厚的切片,然后分別進行蘇木素和伊紅染色(HE)、馬蘇及天狼星紅染色,顯微鏡下觀察肺實質(zhì)及肺間質(zhì)的改變。免疫組織化學染色分析ACE2、ANG-(1-7)和TGF-β的表達。Western-blot實驗測定ACE-2,TGF-β蛋白表達。聚合酶鏈式反應(RT-PCR)分析ACE2與TGF-β的mRNA水平的表達。ELISA檢測肺組織中ANG-(1-7)含量。

8、>　　實驗結(jié)果：
　　氣管滴入博萊霉素導致大鼠體重明顯下降,并大大增加了肺組織系數(shù)。經(jīng)丹參酮 IIA治療后明顯遏制了大鼠體重的進行性減輕,同時顯著降低了大鼠肺組織的系數(shù)。
　　大鼠肺組織病理學結(jié)果:HE染色顯示博萊霉素干預后,隨著時間的延長,肺泡損傷、各種炎細胞浸潤、肺間質(zhì)增生,而丹參酮 IIA扭轉(zhuǎn)了博萊霉素導致的大鼠肺損傷的這些改變。馬蘇染色顯示博萊霉素導致逐漸加重的肺泡破壞、肺間質(zhì)增厚、成纖維細胞擴散,而丹參酮 IIA可

9、以減輕這些改變。天狼星紅染色顯示博萊霉素組隨著時間的延長,越來越多的III型膠原纖維集聚在大鼠肺組織,而丹參酮IIA明顯減輕了這些改變。
　　免疫組織化學染色顯示在28天終點,博萊霉素導致大鼠肺組織中 ACE-2的表達顯著減少。丹參酮IIA逆轉(zhuǎn)了大鼠肺組織ACE-2的表達。通過WB實驗進一步檢測 ACE-2的蛋白質(zhì)水平:博萊霉素組 ACE-2蛋白水平明顯減少,而丹參酮IIA提升了 ACE-2的表達。PCR實驗結(jié)果顯示:ACE-2的