白藜蘆醇抗胃癌的實驗研究.pdf

1、山東大學博士學位論文白藜蘆醇抗胃癌的實驗研究姓名：周海波申請學位級別：博士專業(yè)：內科消化指導教師：朱菊人20030421山東大學博士學位論文白藜蘆醇抗胃癌的實驗研究博士研究生周海波導師朱菊人摘要目的胃癌是消化系統(tǒng)常見的惡性腫瘤，其發(fā)病率和死亡率目前居我國惡性腫瘤的首位，手術切除是治療胃癌的首選方法，但由于臨床缺乏特異性癥狀和體征，早期診斷率較低，手術對進展期胃癌的治療效果并不理想，根治手術后有50％患者5年內出現(xiàn)局部復發(fā)和／或遠處轉移，

2、常見的復發(fā)和轉移部位是切除部位、肝臟和腹膜表面。因此，除手術和放療外，化療仍是胃癌治療的主要手段。白藜蘆醇是普遍存在于葡萄屬植物中的一種物質。對白藜蘆醇藥理作用的認識源自“frenchparadox”現(xiàn)象，其重要原因在于法國人飲用紅葡萄酒，而紅葡萄酒含有多酚類化合物，具有抗脂質過氧化作用，脂質過氧化在動脈粥樣硬化等心血管疾病的發(fā)生中起著非常重要的作用，白藜蘆醇即是這些多酚類化合物之一。近年來發(fā)現(xiàn)白藜蘆醇還具有抗癌作用，從而開辟了白藜蘆醇

3、生物活性研究的新領域。本研究取人胃癌組織細胞進行培養(yǎng)，采用~釘汀比色法測定白藜蘆醇對胃癌原代細胞的生長抑制率；探討白藜蘆醇在體外誘導人胃癌原代細胞發(fā)生凋亡的可能性，揭示該凋亡發(fā)生與bcl一2和bax之間的關系：利用人胃癌原代細胞裸鼠移植瘤模型，進一步評價白藜蘆醇在體內誘導胃癌細胞凋亡的有效性及其作用機制，同時為其臨床應用提供理論基礎和方法學依據。方法在嚴格無菌條件下，取手術切除的新鮮胃癌組織標本，制各單細胞懸液，以臺盼藍染色法計數(shù)活細胞

4、，調整單細胞懸液至活細胞濃度為5105／ml。培養(yǎng)后人工純化為胃癌細胞。采用MTT比色法測定白藜蘆酵、絲裂霉素和紫杉醇對胃癌原代細胞的生長抑制率；細胞凋亡的形態(tài)學變化采用透射電鏡觀察；TUNEL染色法測定胃癌原代細胞凋亡率；通過免疫組織化學法和RT—PCR檢測凋亡相關基因bcl一2和bax的表達。Balb／C裸鼠5只，無菌條件下，裸鼠右后背側部或右頸部皮下接種原代細胞懸液，接種后，裸鼠在無菌、恒溫和恒濕條件下飼養(yǎng)，每日觀察確定腫瘤出現(xiàn)時