雙孔介質在高速色譜分離中的應用.pdf

1、本文主要研究了雙孔型色譜介質在手性拆分和質粒純化中的應用。首先以甲基丙烯酸縮水甘油酯為單體，雙甲基丙烯酸乙二醇酯為交聯劑，采用固液聯合致孔方式，通過一步懸浮聚合制備了球形樹脂，利用掃描電鏡和壓汞儀對樹脂的外貌和內部孔結構進行了表征，結果表明此樹脂具有雙孔型結構。 以雙孔型樹脂為載體，以三聚氯氰為間隔臂，以牛血清白蛋白為手性配基制備了蛋白質手性色譜固定相。以d，l-色氨酸為探針，考察了pH值、流速和上樣量等因素對分離性能的影響，結

2、果表明上述因素對分離度的影響較小。當上樣量為0.1mg，流速為1800cm/h時，色氨酸的分離度仍可達到1。比較了色氨酸在雙孔型色譜介質上的分離度和在普通色譜固定相上分離度隨流速的變化關系，結果表明在雙孔型介質上的分離度受流速變化的影響較小。 在質粒的提取過程中考察了硫酸銨和氯化鈣對質粒收率及對蛋白質和RNA去除效果的影響。實驗發(fā)現硫酸銨是去除蛋白質和RNA的有效試劑，同時能夠保持較高的質粒收率，當質粒提取液中硫酸銨的濃度達到2

3、.5M時，質粒的純化因子可達10.2，而質粒的收率在90％以上，氯化鈣的加入也能有效去除質粒提取液中蛋白質和RNA，但是質粒的收率相對較低。 以苯酚為配基，對雙孔型樹脂進行修飾，制備了疏水性色譜固定相，用于質粒的純化，優(yōu)化了色譜分離條件。由于雙孔型樹脂中大孔的存在，提高了介質內部的傳質速率，增大了對生物大分子的吸附表面，使得雙孔型介質可以在高流速下進行質粒的純化，同時保持較高的分離度。當流速為20cm/min，上樣量為8mL(質