微流控電泳芯片在單細胞分析中的應用.pdf

1、山東大學碩士學位論文中文摘要微流控分析系統(tǒng)恤TAS)在生物細胞領域的發(fā)展引起了廣泛的關注。微流控芯片的微米尺寸的通道更適合單細胞樣品的引入，操縱，反應，分離和檢測。因此將這些功能集成在微流控芯片上成為當前分析的一個熱點。本論文用微流控電泳芯片對單細胞分析進行一些研究。主要分三部分:1.微流控電泳芯片電化學檢測人單個肝癌細胞中的谷骯甘膚ell.人單個活細胞中過氧化物酶的測定。111.Bi和CN對活細胞內酶活性的影響.第一部分用微流控電泳芯

2、片電化學檢測的方法測定了人單個肝癌細胞中的谷‘膚甘肚。我們選擇用電泳緩沖液代替常用的PBS作為細胞懸浮液，用壓力將單個細胞導入芯片的雙T交叉點，用毛地黃皂普化學蝕孔和外加電場相結合的溶膜方式，利用金汞齊電極對谷肌甘膚良好的選擇性檢測得到單個細胞中谷肌甘膚唯一的電泳峰。實現(xiàn)了芯片毛細管電泳電化學檢測單細胞的快速分離優(yōu)勢及選擇性檢測。然后用標準曲線對細胞中谷耽甘膚的含量進行了定量，測得人單個肝癌細胞中谷膚甘肚含量與文獻值一致。第二部分建立了

3、一種微流控電泳芯片電化學檢測人單個活細胞內髓過氧化物酶(MPO)的方法。我們先用毛地黃皂普將細胞蝕孔，然后通過電遷移將蝕孔后的單個中性粒細胞導入芯片雙T交叉點并貼壁。緩沖液中底物H2Q和H202通過細胞膜上的微孔擴散進入細胞，被胞內MPO催化反應生成電活性產物BQ.BQ通過細胞膜上微孔擴散回到細胞周圍的溶液中，在細胞周圍形成BQ區(qū)帶。再加電泳電壓將此區(qū)帶遷移到分離通道的檢測端并用碳纖維微盤電極檢測。得到的電泳峰的峰面積對應于活細胞內MP

4、O的含量。通過同一個細胞溶膜后電泳峰面積及標準溶液電泳峰的峰面積可以對活細胞內MPO進行定量。測得人單個中性粒細胞內MPO含量與細胞提取液中測得值一致。第三部分研究了Br一和CN一對人單個活中性粒細胞內MPO活性的影響。Br一和CN一對胞內MPO影響非常明顯。2.5x102mo1ILBr一對中性粒細胞中MPO刺激40min后其活性降為原來的32%s5x1了moltLCM對中性粒細胞中MPO活性的抑制作用更顯著，40min后其活性降為原來

5、的7.8%d主題詞:微流控芯片，毛細管電泳，電化學檢A9，單細胞分析原創(chuàng)性聲明本人鄭重聲明:所呈交的學位一論文，是本人在導師的指導下，獨立進行研究所取得的成果。除文中已經注明引用的內容外，木論文不包含任何其他個人或集體己經發(fā)表或撰寫過的科研成果。劉本文的研究作出重要貢獻的個人和集體，均己在文中以明確方式標明。本聲明的法律責任由木人承擔。論文作者簽名丁粉食尹日期:pCA關于學位論文使用授權的聲明木人完全了解山東大學有關保留、使用學位論文的