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文檔簡介
1、解淀粉芽胞桿菌JK3(Bacillus amyloliquefaciens JK3)是從煙草根際土壤中分離出來的有益菌株,它對引起茄科植物產生青枯病的青枯雷爾氏菌有明顯的抑制效果。目前,我們已經將其制成制劑,應用于煙草青枯病的防治。制劑中起主要作用的是芽胞,其次是該芽胞桿菌產生的活性物質。本研究中,對該芽胞桿菌的發(fā)酵進行了優(yōu)化,以增加活菌數及活性物質的產量,并對其抗青枯菌活性物質進行了分離鑒定。
本研究通過單因素實驗、Plac
2、kett-Burman實驗設計、爬坡實驗及中心組合實驗(Central Composite Design,CCD),對該株解淀粉芽胞桿菌JK3進行發(fā)酵條件優(yōu)化。最終確定小麥粉、豆粕粉、K2HPO4的濃度分別為14.57 g/L、9.75g/L、5.46g/L時,活菌數和抑菌圈直徑均能取到較大值,預測值分別為28.63×108、1.95cm。按此配方進行驗證,每組重復3次,得到實際值為(26.53±3.87)×108、1.82±0.03c
3、m,預測精度為92.7%和93.3%,優(yōu)化后的培養(yǎng)基較LB分別提高了122.38%、30%。本文對溫度、初始 pH、接種量等條件進行了優(yōu)化,得到在溫度、初始 pH、接種量分別為34℃、5、2%時活菌數達到最大;溫度、初始pH分別為31℃、8時抗青枯活性最大,接種量對抗青枯活性的影響不大。在進行發(fā)酵條件優(yōu)化時,我們發(fā)現,活菌數與抗青枯菌活性之間存在一定的負效應??紤]到發(fā)酵主要目的為提高活菌數,故此以活菌數最大的條件為發(fā)酵條件。按優(yōu)化好的發(fā)
4、酵培養(yǎng)基及培養(yǎng)條件進行3.5 L小型發(fā)酵罐發(fā)酵,活菌數及抑菌圈直徑分別為(41±7)×108、1.38±0.02 cm。
對抗青枯菌活性物質的鑒定中,通過HPLC和MALDI-TOF-MS檢測以及脂肽類抗生素Surfactin與純化得到Iturin和Fengycin混合物進行抗青枯菌活性檢測,我們初步判定活性物質為脂肽類抗生素 Surfactin。但在進一步確定活性物質是否為Surfactin時,我們發(fā)現 Surfactin基
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