RXR motif在倍半粘合酶催化產物特異性中的作用.pdf

1、萜類化合物普遍存在于植物、微生物的次級代謝產物中。隨著越來越多的萜類化合物的發(fā)現，對萜類合酶的研究也更加深入，這不僅可以幫助我們從理論上認識萜類化合物的合成機制，理解萜類合酶結構和功能的關系，還可以幫助在藥物、香精等應用方面的研究更進一步。萜類合酶不同的催化機理是揭示萜類化合物數量和結構多樣性的關鍵，對其保守基序DDXXD、NSE/DTE、RXR的研究更是其中的重點。本文選取了倍半萜合酶保守基序 RXR作為研究切入口，探討在兩種不同的倍

2、半萜合酶催化機制中該保守基序對催化產物特異性的影響，并做了如下工作：
　　1.為探討RXR基序對倍半萜環(huán)化酶產物特異性的影響，選擇對青蒿紫穗槐二烯合酶（ADS）R262、R264進行單突變，并將R262K和T296A/V/I進行聯合突變，發(fā)現：R262輔助farnesyl diphosphate（FPP）離子化釋放焦磷酸基團需要側鏈氨基的存在，但是環(huán)化反應中間產物 nerolidyl diphosphate（(R,E)-NPP）的

3、離子化不需要R262的協助就可以實現。推測T296A/V/I可以和 R262K通過其他氨基孫或底物碳骨架發(fā)生相互作用，而且這種相互作用的結果跟底物構象有關，雙突變不能作用于(E,E)-FPP，但是可以催化(R,E)-NPP、(S,E)-NPP分別生成對應的amorpha-4,7(11)-diene和farnesene，以及二者共有的nerolidol、α-bisabolol，作用于(Z,E)-FPP時，雙突變可以抑制 R262K環(huán)化反應

4、中陽離子中間體對水的捕獲。R264K對產物沒有影響。
　　2.為探討RXR基序對反式倍半萜環(huán)化酶產物特異性的影響，選擇反式環(huán)化酶煙草馬兜鈴烯合酶（TEAS）R264、R266進行單突變，發(fā)現：雖然TEAS催化(Z,E)-FPP經歷順式異構，但是R264K并不能明顯增加產物中萜醇的生成；底物伯碳位焦磷酸基團的釋放需要266位側鏈含氨基的殘基協助，但是叔碳位焦磷酸的基團則不需要該位點發(fā)揮作用。R266K突變體使酶喪失活性。