臨床基因擴增檢驗實驗室工作規(guī)范

1、臨床基因擴增檢驗實驗室工作規(guī)范 床基因擴增檢驗實驗室工作規(guī)范為使基因擴增檢驗技術有效地應用于臨床，更好地為疾病的預防、診斷和治療服務，保證檢驗質量，特制定本規(guī)范。 一、臨床基因擴增檢驗實驗室的規(guī)范化設置及其管理 一、臨床基因擴增檢驗實驗室的規(guī)范化設置及其管理 臨床基因擴增檢驗實驗室的規(guī)范化設置詳見《臨床基因擴增檢驗實驗室管理暫行辦法》(衛(wèi)醫(yī)發(fā)[2002]10 號文)附件《臨床基因擴增檢驗實驗室基本設置標準》。為避免污染，必須嚴格遵循《臨

2、床基因擴增檢驗實驗室設置標準》設置臨床基因擴增檢驗實驗室。臨床基因擴增檢驗實驗室四個隔開的工作區(qū)域中每一區(qū)域都須有專用的儀器設備。各區(qū)域都必須有明確的標記，以避免設備物品如加樣器或試劑等從其各自的區(qū)域內移出從而造成 不同的工作區(qū)域間設備物品發(fā)生混淆。進入各個工作區(qū)域必須嚴格遵循單一方向順序，即只能從試劑貯存和準備區(qū)、標本制備區(qū)、擴增反應混合物配制和擴增區(qū)(簡稱擴增區(qū))至產物分析區(qū)，避免發(fā)生交叉污染。在不同的工作區(qū)域應使用不同顏色或有明顯

3、區(qū)別標志的工作服，以便于鑒別。此外，當工作者離開工作區(qū)時，不得將各區(qū)特定的工作服帶出。清潔方法不當也是污染發(fā)生的一個主要原因，因此實驗室的清潔應按試劑貯存和準備區(qū)至擴增產物分析區(qū)的方向進行。不同的實驗區(qū)域應有其各自的清潔用具以防止交叉污染。(一)試劑貯存和準備區(qū) 試劑貯存和準備區(qū) 下述操作在該區(qū)進行：貯存試劑的制備、試劑的分裝和主反應混合液的制備。貯存試劑和用于標本制備的材料應直接運送至試劑貯存和準備區(qū)，不能經過產物分析區(qū)。在打開含有反

4、應混合液的離心管或試管前，應將其快速離心數(shù)秒。試劑原材料必須貯存在本區(qū)內，并在本區(qū)內制備成所需的貯存試劑。當貯存試劑溶液經檢查可用后，應將其分裝 貯存?zhèn)溆?，避免由于經常打開反應管吸液而造成污染。含反應混合液的離心管或試管在冰凍前都應快速離心數(shù)秒。大多數(shù)用于擴增的試劑都應冰 凍貯存。為避免因單次反應取液而頻繁的凍融主貯存試劑，應分裝冰凍貯存試劑溶液。貯存試劑的分裝體積根據(jù)通常在實驗室內一次測定所需的擴增反應數(shù)來決定。主反應混合液的組成成份

5、尤其是聚合酶的適用性和穩(wěn)定性通過預試驗來檢查，評價結果必須有書面報告。對于“熱啟動“技術(在第一個高溫變性步驟后加入酶)，聚合酶也可不包含在 主反應混合液中。在整個本區(qū)的實驗操作過程中，操作者必須戴手套，并經常更換。此外，操作中使用一次 性帽子也是一個有效地防止污染的措施。嚴禁用嘴吸取液體，加樣器和吸頭等必須經高壓處理。工作結束后必須立即對工作區(qū)進行清潔。本工作區(qū)的實驗臺表面應可耐受諸如次氯酸鈉的化學物質的消毒清潔作用。實驗臺表面的紫外

6、照射應方便有效。由于紫外照射的距離和能的方法是在打開反應管前快速離心數(shù)秒?？墒褂皿w積較小的離心機，因其所占實驗臺面 小，易于用一只手操作，適合于大多數(shù)超凈臺。防潮屏障如石蠟油或輕礦物油也具有防污染作用，但必須注意的是，礦物油本身也可能成為一種持續(xù)性的污染源。用過的加樣器必 須注意清潔消毒。完成操作及每天工作后都必須對實驗室臺面進行清潔和消毒，紫外照射方法與前面區(qū)域相同。如有溶液濺出，必須處理并作出記錄。(四)擴增產物分析區(qū) 擴增產物分析

7、區(qū) 下述操作在本區(qū)內進行：擴增片段的測定。核酸擴增后產物的分析方法多種多樣，如膜上或微孔板上探針雜交方法(同位素標記或非同位素標記)、瓊脂糖凝膠電泳、聚丙烯酰胺凝膠電泳、Southern 轉移、核酸測序方法等。目 前國內的商品試劑盒絕大部分均采用非同位素標記的微孔板上探針雜交方法，即 PCR-ELISA 方法，也有膜上探針雜交方法。本區(qū)是最主要的擴增產物污染來源，因此必須注意避免通過本區(qū)的物品及工作服將擴增產物帶出。在使用 PCR-EL

8、ISA 方法檢測擴增產物時，必須使用洗板機洗板，廢液必須收集至 1mol/L HC1 中，并且不能在實驗室內傾倒，而應至遠離 PCR 實驗室的地方棄掉。用過的吸頭也必須放至 1mol/L HCl 中浸泡后再放到垃圾袋中按程序處理，如焚燒。由于本區(qū)有可能會用到某些可致基因突變和有毒物質如溴化乙錠、丙烯酰胺、甲醛或同位素等，故應注意實驗人員的安全防護。本區(qū)的清潔消毒和紫外照射方法同前面區(qū)域。本區(qū)如采用負壓條件或減壓情況下(如安裝排風扇)可減

9、少擴增產物從本區(qū)擴散至前面區(qū)域的可能性。二、臨床基因擴增檢驗實驗室質量保證 二、臨床基因擴增檢驗實驗室質量保證 臨床基因擴增檢驗實驗室質量保證涉及到整個基因擴增檢驗的所有階段，即測定分析前的標本采集處理、測定中的核酸提取、擴增和產物分析以及測定后的結果報告等。(一)標本的采集 標本的采集 常用于基因擴增檢測的臨床標本包括 EDTA 或枸櫞酸鈉抗凝全血或骨髓、血清或血漿、痰、腦脊液、尿及分泌物等。采血液等樣本時，應使用一次性密閉容器，如真