1.人巨噬細胞金屬彈性蛋白酶在胃癌細胞及胃癌組織中的表達及臨床意義;2.胃癌和結腸癌患者二氫嘧啶脫氫酶基因多態(tài)性與5fu代謝及臨床意義探索

1、浙江大學博士學位論文1.人巨噬細胞金屬彈性蛋白酶在胃癌細胞及胃癌組織中的表達及臨床意義;2.胃癌和結腸癌患者二氫嘧啶脫氫酶基因多態(tài)性與5-FU代謝及臨床意義探索姓名：章宏申請學位級別：博士專業(yè)：內科學（消化系?。┲笇Ы處煟簠栍忻?0060201浙江大擘博士學位論黨年8 月問胃腸外科和腫瘤外科胃癌住院手術病人。共5 8 例，其中男性4 3 例，女性1 5 側；年齡最大7 6 歲，最小3 2 歲，平均5 S ．5 ±l o ．6

2、多。所有胃癌意轡組織標本均包攢j 猙癌組織、癌努組織、遠處正常組織。標本離體半小時內采樣* 2 0 0 ℃液氮保存鑄用。2 ．纓璉壤券 霉薅緞瑰揀M G c ．8 0 3 、s o C ．7 粥l(xiāng) 、A G s 贍于中科院上海纓駐生物研究所。常規(guī)綱胞培養(yǎng)，培養(yǎng)基為R P M I l 6 4 0 細胞培養(yǎng)基( 美囡G I B C 0 公司)宓霪1 0 ％，l 、牛盤清( 轅翊器拳青公溺) ，零簇纓燕稱M G C ．8 0 3 、S 聰C

3、。7 粥l(xiāng) 、A G S在含1 0 ％小牛血清的培養(yǎng)液R P M I l 6 4 0 中，于3 7 ℃、5 ％C 0 2 條件下培養(yǎng)，每2 ～3 必傳代一次。取艇長狀態(tài)良好、達9 0 ％融合的鞠脆俸為磺究對象。3 ．R T - P C R 檢測H M E m R N A 表達總R N A 提?。喝∩鲜雠囵B(yǎng)細胞和三種組織標本各1 0 0 m g 分別加入1 H z o ll m l ，破孬孳層熬纓魏窩碾耱螽豹緦織樣本分別轉移懋無鼢淞酶秘無

4、D N A 黲豹1 ．5 m l E p p e n d o r f 管，然后根據(jù)試劑說明書抽提R N A ，最后用D E P c 處理水溶解R N A 。提取茨憨賦A 經(jīng)絮辨勢必斃疫詩測定提聯(lián)物贅濃麓，O D 2 6 艙g e 魄僮在1 ．8 以．0 之刪。逆轉聚反應；嗣上述簸瑾后樣本中據(jù)敬的2 隧總融《A 在下述2 0 弘l 反應體系中逆轉錄成c D N A ，該反應體系組成如下：5 ×R T - B u 婦4 m ，o

5、l i g o d T ( 1 8 ) 2 ．5 岬o l ，Ll ¨l ，d N T p 5 m m o l 彪l 肛l 。R N A a s i n ( R N A 酶抑制劑) 2 0 U ，去離子求約1 3 恥l 。7 0 ℃預變鍵5 m i n ，然后熱入M ．M ￡v 逆轉錄酶2 0 0 u ，4 2 ℃孵育l l l ，7 2 ℃加熱1 0 m i n 滅活逆轉錄酶。愆R 反應：取上述逆轉錄反殿產(chǎn)躲2 玲予2 0

6、堪轟應搭軟孛遴囂p c R 反應。反成體積組成如下：1 0 ×B u 舵r 2 肛l 、d N T P l O m m ／I ．O ．4 “l(fā) 、M g C l 22 5 m m o 肌1 ．4 叫、2 ．5 u 鞠淵A 聚合簿O ．5 瓣、模扳2 鷹、上、下游黲異雩| 魏2 啦o l 各e 。5 ≯l 、去褰子水1 2 ．7 “l(fā) 。引物序列為5 ’．T G G C c A T T C c l l ’A O G T c T