Vero細胞化學污染物毒性表現(xiàn)特征及在生物毒性檢測中的可行性分析.pdf

1、近年來飲用水中化學污染物逐漸增多，對人體健康和生態(tài)環(huán)境造成的危害日益加重，因此飲用水及相關材料的安全評價具有重要意義。但目前為止，國內(nèi)尚無較為完善的相關評價方法。細胞毒性試驗，尤其是Vero細胞與人體高度同源，對各類化學物質(zhì)的響應具有一定的普適性，并且培養(yǎng)方法簡單。 本文研究了有機物對Vero細胞形態(tài)的影響和對細胞增殖的抑制，通過比較這兩種細胞毒性表現(xiàn)特征的靈敏度，分析了Vero細胞變形法在化學物質(zhì)生物毒性檢測中的可靠性，同時

2、應用流式細胞儀探索了污染物作用下Vero細胞狀態(tài)的變化及可能原因，最后嘗試用該法來考察飲用水相關材料的生物安全性。 兩種典型有機化學物2,4，6-三氯苯酚(TCP)和鄰苯二甲酸二辛酯(DOP)作用于Vero細胞后的形態(tài)觀察結(jié)果表明：和對照相比，當TCP濃度為0.5mg·L<'-1>時，已有少量細胞變圓。隨著藥物濃度的增加，變圓細胞的比例增大；而DOP濃度為0.5ppm時細胞輪廓開始加深，透明度下降，隨著濃度進一步增加，形態(tài)變化

3、愈發(fā)明顯。用MTT比色法測定TCP和DOP對細胞增殖抑制的結(jié)果表明：TCP濃度大于1mg·L<'-1>，DOP濃度大于1ppm時，均會對Vero細胞的增殖產(chǎn)生抑制作用；TCP和DOP濃度分別大于5mg·L<'-1>和5ppm時，藥物濃度和抑制率之間呈良好的正相關性。而TCP濃度小于1mg·L<'-1>時對細胞增殖沒有抑制作用，DOP在0.25ppm～2ppm之間抑制率隨濃度呈不規(guī)律變化。 以TCP為例，用流式細胞術分析在有機物

4、作用下Vero細胞狀態(tài)的變化，結(jié)果表明：(1) TCP對Veto細胞的毒性表現(xiàn)特征和TCP濃度有直接關系。當TCP濃度較低(小于1mg·L<'-1>)時，細胞毒性主要表現(xiàn)為細胞形態(tài)的變化；當TCP濃度大于1mg·L<'-1>時，細胞的增殖開始受到抑制；(2) TCP對Vero細胞的毒性表現(xiàn)特征和其暴露于TCP的時間也有重要關系。TCP作用24h后Vero細胞的毒性主要表現(xiàn)為對細胞膜完整性的影響，產(chǎn)生凋亡的細胞比例較小。而48h后，Ver

5、o細胞出現(xiàn)凋亡現(xiàn)象，并且隨TCP濃度增加，凋亡和壞死細胞比例大量增加。細胞復壯實驗進一步證實24h內(nèi)TCP引起Vero細胞形態(tài)的變化不會導致細胞壞死或凋亡，細胞仍處于存活狀態(tài)。 結(jié)合細胞形態(tài)變化和流式細胞儀散點圖，推測細胞形態(tài)變化和細胞膜損傷有關。由細胞膜損傷導致的細胞變形可能是一種較細胞增殖率、凋亡、壞死等指標更為敏感的化學物細胞毒性表征方法。最后，利用Vero細胞形變法對給水PVC管和一次性塑料杯進行細胞毒性評價，MTT法

6、作為對照。實驗結(jié)果表明：(1)給水PVC和一次性塑料杯的材料浸提液會引起Vero細胞形態(tài)的變化。當浸提液濃度一定時，隨著浸提溫度的升高，含兩種材料浸提液的培養(yǎng)基中變形細胞的比例增加，說明溫度升高會導致材料浸提液中毒性物質(zhì)的增多或濃度增大。(2)當溫度一定(37℃)時，隨著浸提液體積比的增加，變形細胞的比例明顯增加。細胞變形和浸提液濃度之間存在較好的相關性。(3)兩種材料在各溫度下的浸提液對Vero細胞增殖有_定的抑制作用，但抑制率和溫度