碩士高級免疫學實驗技術概述

1、高級免疫學實驗技術 2019級碩士研究生,吉林大學白求恩醫(yī)學院免疫學系袁紅艷,選用教材,免疫學實驗課要求,不許遲到、早退、缺課。不允許擅自換教室。穿白大衣。愛護實驗器材（使用后用水沖洗，然后放入指定地點），損壞者按價賠償。課后認真打掃教室衛(wèi)生（擦地面和桌面）。關掉手機或設置為振動狀態(tài)。,實驗分組,,實驗操作內容安排,淋巴細胞轉化試驗酶聯免疫吸附試驗（ELISA）免疫印跡試驗(Western blot)巨噬細胞吞噬功

2、能測定,自講安排,自講評分標準,考核方式,,考核要求,自講自評（20分），每組成員合作準備資料和上講臺講述，老師及其他組給評分，取平均成績，4人給相同的自講成績。綜合考試（40分），共四個大題，每題10分。（周五下午）出勤情況（10分），每4學時1分。實驗設計（30分），應用免疫學相關實驗方法，設計與自己專業(yè)的課題。（12.29之前上交，如能完成可在本周五上交）談談你對本次免疫學實驗教學的看法。包括:內容安排、備課情況、

3、講授情況等的優(yōu)缺點、意見與建議。（最后一次課當堂寫。）,實驗設計,應用免疫學相關實驗方法，設計與自己專業(yè)的課題。包括:1）題目2）研究內容①②③3）研究方案①②③4）創(chuàng)新點,實驗設計的原則,研究的題目：確定研究題目是開展研究工作的首要任務。研究摘要：研究背景，要開展的主要研究（利用什么樣的方法開展研究），研究意義（本次研究的預期成果及其推動科學進步的作用）。研究內容：敘述主要開展的工作。研究方案：利用什么樣的手段去解決研

4、究內容提到的相關工作。研究的特色與創(chuàng)新之處：主要科學貢獻。,題目：XX細胞因子誘導肺癌細胞凋亡的作用及其機制研究摘要：肺癌是最常見的腫瘤之一。XX與多種腫瘤的發(fā)生發(fā)展有關，但其在肺癌中的作用仍缺乏報道。本研究采用人肺癌細胞，利用流式細胞術分析XX誘導人肺癌細胞凋亡作用，通過分析Caspase3,8,12等確定XX誘導腫瘤細胞凋亡機制。本研究不僅可以進一步揭示XX抗腫瘤作用機制，也為尋找新的肺癌治療方法提供研究基礎。,實驗設計的基本

5、思路,研究內容：1）XX在人肺癌腫瘤細胞的表達分析，確定XX表達與肺腫瘤的關系。2）檢測患者血清XX水平，確定其輔助診斷肺癌的價值 研究方案：1）采用腫瘤組織切片，通過免疫細胞化學染色觀察XX在人肺癌組織中的表達情況。2）采用ELISA法檢測血清XX水平。研究的特色與創(chuàng)新之處：本研究闡述了XX與肺癌的關系，并提出XX可作為肺癌的血清學診斷標志物，研究發(fā)現XX可以誘導肺癌細胞凋亡，并闡述了其作用機制。,實驗設計的基本思路,免疫學實驗技

6、術概述,小調查-對免疫學實驗技術的了解,目前你知道的免疫學實驗技術有哪些？這些免疫學實驗技術的原理是什么？這些技術有什么應用？,免疫學實驗技術概述,免疫學技術的范疇,1、對具有免疫活性物質的定性、定量測定2、對免疫系統(tǒng)的組成成分的數量、狀態(tài)的測定,免疫學檢測技術的評價,一、評價標準Specificity（特異）Sensitivity（敏感）Simplicity（簡便）Safety（安全）Saving（節(jié)約）二、特

7、異性與敏感性的關系特異性高、敏感性低敏感性高、特異性低,免疫學實驗技術概述,抗原抗體反應淋巴細胞的檢測技術細胞因子的檢測技術免疫學常用的分子生物學技術,多克隆抗體單克隆抗體基因工程抗體 前兩者常用于實驗研究，而后者用于臨床治療研究。,抗體的應用,多克隆抗體是通過免疫動物血清分離獲得優(yōu)點：制備方法比較簡單，價格低廉，制備所需時間短等 在確定新基因編碼蛋白研究方面，仍然是首選抗體類型。但由于多克

8、隆抗體含有針對多個抗原表位的抗體成分，也可能包括抗原變性后暴露的新抗原表位，因此，多克隆抗體在檢測變性抗原——如采用Western Blot檢測蛋白時，其效果比單克隆抗體更敏感。,多克隆抗體,缺點：純度差易發(fā)生交叉反應來源有限所產生的抗體因動物個體差異滴度不同不易標準化 因免疫動物血清中含有非常復雜的多種蛋白質成分，所以在進行實驗室分析、檢測之前，必須將其有效的抗體成分分離、純化。,多克隆抗體,單克隆抗體(mA

9、b)是通過B細胞雜交瘤獲得與多克隆抗體相比，單克隆抗體主要具有以下三個顯著特點（優(yōu)點）： ①高度均質性②高度特異性③來源穩(wěn)定不足：制備方法比較復雜，價格昂貴，制備所需時間較長。,單克隆抗體,mAb是由起始于一個B淋巴細胞的單克隆細胞系所分泌的，因此是一種每個抗體分子的結構(包括氨基酸排列順序和空間構型)都相同的均質性抗體。,高度均質性,,mAb只專一的識別抗原分子上單個抗原位點，因此容易獲得特異性抗體，較少產生交叉反應。,高

10、度特異性,,可大量生產，當得到穩(wěn)定分泌mAb的雜交瘤細胞系后，可置液氮中長期保存，需要時取出復蘇，既可在體外培養(yǎng)中收獲mAb，也可將雜交瘤細胞接種入同系小鼠腹腔內，然后從荷瘤小鼠的腹水中收獲大量mAb。,來源穩(wěn)定,,根據實驗的目的不同，其分離、純化的純度要求也不同。作為ELISA檢測時的抗體，部分情況下飽和硫酸胺純化即可；最常使用的抗體是經過A蛋白(Protein A)親和層析獲得的IgG型抗體；免疫放射測定的標記用抗體必須達到雙

11、級純才可應用(親和層析純+SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳純)。,純度要求,單克隆抗體在制備過程中經過嚴格的篩選，因此應根據不同的應用目的選擇不同單克隆抗體亞類，如標明供ELISA檢測用的單克隆抗體，可能不適合Western Blot檢測。作為初學者尤其應該注意各類單克隆抗體標明的應用范圍，而多克隆抗體一般情況下均有較寬的適用范圍。,適用范圍,一抗和二抗,一級抗體：抗原特異性的抗體二級抗體：抗抗體（針對一抗的Fc段，具有種屬特異性）,Ag,