艾滋病檢測技術(shù)及診斷

1、艾滋病檢測技術(shù)及診斷,,檢測依據(jù)和行業(yè)標準,樣品的采集和處理,樣品種類及用途血液標本的采集抗凝劑的選擇樣品的保存樣品的運送,樣品種類及用途,全血、血清、血漿、口腔黏膜滲出液、尿液及干血斑（ DBS ）樣品可用于HIV抗體檢測。全血、血清、血漿、病毒培養(yǎng)上清液可用于HIV抗原檢測。抗凝全血可用于CD4+和CD8+T淋巴細胞測定。血漿、DBS可用于HIV-1病毒載量、基因型和耐藥檢測。淋巴細胞富集液、外周血單核淋巴細胞（PB

2、MC）及全血可用于HIV核酸定性與定量、基因型檢測和HIV-1分離培養(yǎng)。,血液標本的采集,抗凝全血：消毒局部皮膚，用有抗凝劑的真空采血管抽取適量靜脈血，或用一次性注射器抽取靜脈血，轉(zhuǎn)移至加有抗凝劑的試管中，輕輕顛倒混勻6~8次，備用。血漿：將采集的抗凝全血1500~3000r/min離心15分鐘，上層即為血漿，吸出置于合適的容器中，備用。血清：根據(jù)需要，用不含抗凝劑的真空采血管抽取5~10ml靜脈血，或一次性注射器抽取靜脈血，轉(zhuǎn)移至

3、無抗凝劑的試管中，室溫下自然放置1~2小時，待血液凝固、血塊收縮后再用1500~3000r/min離心15分鐘，吸出血清，置于合適的容器中，備用。,抗凝劑選擇,CD4+和CD8+T淋巴細胞檢測：EDTA、肝素、枸櫞酸鈉病毒分離、核酸檢測： EDTA、枸櫞酸鈉,樣品的保存,抗體檢測：血清或血漿樣品，短期（1周）內(nèi)進行檢測的可存放于2~8℃，一周以上應(yīng)存放于-20 ℃以下。核酸檢測：4~8h內(nèi)分離血漿，4天內(nèi)檢測可存放于4 ℃,3個月內(nèi)

4、存放于-20 以下，3個月以上-70 ℃以下保存。CD4+T淋巴細胞檢測：室溫保存，時間不超過24h。如果用CD45設(shè)門，樣品保存不超過72h。,樣品的保存,篩查陽性樣品應(yīng)及時進行補充試驗，篩查陰性樣品，可根據(jù)具體需要決定保存時間，建議至少保存1個月。特殊用途或?qū)ｍ楉椖康臉悠犯鶕?jù)具體要求確定保存時間。補充試驗陽性樣品按照國家生物樣品管理的有關(guān)規(guī)定執(zhí)行。,樣品的運送,標本篩查陽性（復(fù)檢需用三代試劑），送檢單位必須聯(lián)系受檢者，在仔細核實受

5、檢者身份等信息后重新采集1份全血。將篩查陽性的血清與重新采集的全血共2份樣品一同送至本中心。要求送檢血清量不得少于0.5ml，送檢單位對重新采集的全血不得做任何處理。標本的標識須用正楷字標明受檢者姓名、性別和采集時間（年/月/日）。篩查陽性的血清應(yīng)裝于1.5ml凍存管內(nèi)，如果沒有也可裝于真空采血管內(nèi)，禁止使用除此之外的其他容器。,樣品的運送,包裝要求：應(yīng)采用WHO提出的三級包裝系統(tǒng) 第一層容器：裝樣品，要求防滲漏。樣品應(yīng)置于帶

6、蓋的試管內(nèi)，試管上應(yīng)有明顯的標記，標明樣品的編號或受檢者姓名、種類和采集時間。在試管的周圍應(yīng)墊有緩沖吸水材料，以免碰碎。隨樣品應(yīng)附有送檢單，送檢單應(yīng)與樣品分開放置。 第二層容器：要求耐受性好、防滲漏、容納并保護第一層容器，可以裝若干個第一層容器。將試管裝入專用帶蓋的容器內(nèi)，容器的材料要易于消毒處理。 第三層容器：放在一個運輸用外層包裝內(nèi)，應(yīng)易于消毒。在第三層容器外面要貼標簽（數(shù)量，收、發(fā)件人）。,樣品的運送,用于抗體

7、檢測的血清和血漿樣品應(yīng)在凍存條件下運送，用于CD4+和CD8+T淋巴細胞測定的樣品應(yīng)在室溫下（18~25 ℃ ）運送。用于病毒載量檢測的樣品應(yīng)在-20 ℃以下運輸。DBS和尿液樣品應(yīng)在室溫下運送。,樣品的運送,樣品的運送,帶螺帽、墊圈的血清凍存管。,樣品的運送,禁止使用EP管,樣品的運送,禁止使用內(nèi)旋蓋凍存管,樣品的運送,在凍存管外套帶蓋的第二層容器,樣品的運送,置于帶冰袋的第三層容器中,樣品的運送,HIV抗體篩查檢測報告的填寫篩查陽

8、性的標本應(yīng)填寫HIV抗體篩查檢測報告，加蓋公章后送檢。報告單不得有空項 ，必須按規(guī)范要求認真完成篩查、復(fù)檢（第一次）、復(fù)檢（第二次）三次試驗。在檢測結(jié)果空白處填寫送檢樣品的S/CO值或發(fā)光值。HIV篩查實驗室篩查不能使用快速檢測方法。兩次復(fù)檢需使用三代試劑，三代試劑檢測結(jié)果陽性方可送檢。,,HIV抗體檢測,HIV抗體檢測的實驗室要求HIV抗體檢測的目的和要點常規(guī)HIV抗體檢測方法結(jié)果報告質(zhì)量控制,HIV抗體檢測,HIV抗

9、體檢測的實驗室要求應(yīng)符合國家對實驗室生物安全的有關(guān)要求實驗室的質(zhì)量控制按《全國艾滋病檢測技術(shù)規(guī)范（2015）》相關(guān)章節(jié)規(guī)定執(zhí)行,HIV抗體檢測,HIV抗體檢測的目的和要點目的：1、HIV抗體檢測可用于診斷、血液篩查、監(jiān)測等。 2、以診斷為目的的檢測是為了確定個體HIV感染狀 況，包括臨床檢測、自愿咨詢檢測、根據(jù)特殊需

10、 要進行的體檢等。 3、以血液篩查為目的的檢測是為了防止輸血傳播 HIV，包括獻血員篩查和原料血漿篩查。 4、以監(jiān)測為目的的檢測是為了了解不同人群HIV感 染率及其變化趨勢，包括高危人群、重點人群和 一般人群。,HIV抗體檢測,要點：1、根

11、據(jù)目的選擇檢測方法及檢測策略。 2、嚴格遵守實驗室SOP。 3、結(jié)果判定以試劑盒說明書為標準。 4、篩查試驗有反應(yīng)，須做補充試驗。補充試驗包 括抗體確證試驗（WB、RIBA/LIA）和核酸 試驗（定性和定量）。,HIV抗體檢測,常規(guī)HIV抗體檢測

12、方法 酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA） 化學發(fā)光或免疫熒光試驗（CIA/IFA） 快速檢測法（RT）：金標法、硒標法、明膠顆粒凝集 試驗（PA）

13、 蛋白免疫印跡試驗（WB）、條帶/線性免疫試驗（RIBA /LIA）,篩查方法,,抗體確證試驗,,HIV抗體檢測,結(jié)果報告篩查報告：篩查試驗無反應(yīng)報告為“HIV抗體陰性”；有反應(yīng)必須進行復(fù)檢，復(fù)檢兩次檢測均無反應(yīng)報告為“HIV抗體陰性”，復(fù)檢檢測均有反應(yīng)或一個有反應(yīng)一個無反應(yīng)需進行“補充試驗”（本中心只提供WB試驗），報告為“HIV感染待確定”，不能出具陽性報告。

14、確證報告：符合HIV-1陽性判斷標準，報告“HIV-1抗體陽性”，符合HIV-2抗體陽性判斷標準，報告“HIV-2抗體陽性”；符合陰性判斷標準，報告“HIV抗體陰性”；符合不確定判定標準，報告“HIV抗體不確定”，備注中注明“2~4周后復(fù)檢”。,質(zhì)量控制,酶免或發(fā)光法抗體檢測的室內(nèi)質(zhì)量控制快速法抗體檢測質(zhì)控,質(zhì)量控制,酶免或發(fā)光法抗體檢測的室內(nèi)質(zhì)量控制試劑盒內(nèi)部對照：試劑盒內(nèi)提供的陰陽性對照血清，用于判斷每次實驗的有效性，但不能作為

15、室內(nèi)質(zhì)控品用。室內(nèi)質(zhì)控品（外部對照）： 1、為試劑盒組分的外部質(zhì)控品，是為監(jiān)控檢測的重復(fù)性而設(shè)置，質(zhì)控品定值必須為弱陽性。 2、可判斷該批樣品檢測的有效性，因此，每次實驗必須含室內(nèi)質(zhì)控品，其結(jié)果無效，必須重新試驗。,質(zhì)量控制,Levey-Jennings質(zhì)控圖質(zhì)控圖參數(shù)：算術(shù)平均值（X）、標準差（S）、變異系數(shù)（CV）及控制限?？刂埔?guī)則：告警（12S）、失控（13S）,質(zhì)量控制,1、告警（12S）：當外部對照的S/

16、CO值超過±2S范圍時，系統(tǒng)處于告警狀態(tài)，應(yīng)予注意，是否可以繼續(xù)檢測需要進一步觀察。,,,,警告:12S規(guī)則違背,質(zhì)量控制,2、失控（13S）：當外部對照的S/CO值超過±3S范圍時，系統(tǒng)處于失控狀態(tài)，本次結(jié)果不能被接受。,,失控:13S規(guī)則違背,質(zhì)量控制,質(zhì)控圖的分析及失控處理 實驗室應(yīng)建立質(zhì)控圖分析及失控情況處理的程序。當出現(xiàn)失控時，必須找出發(fā)生問題的原因，找出解決問題的方法，并消除原

17、因。,質(zhì)量控制,快速檢測質(zhì)控試劑內(nèi)對照 在質(zhì)控窗口內(nèi)出現(xiàn)質(zhì)控帶，該質(zhì)控帶是試劑自帶的內(nèi)部過程質(zhì)控，說明實驗操作全部完成并且實驗所用材料處于工作狀態(tài)。清潔的檢測區(qū)背景是內(nèi)部陰性過程質(zhì)控。如試驗完成后未呈現(xiàn)紅色質(zhì)控帶，說明試劑盒內(nèi)質(zhì)控無效，該試驗結(jié)果無效，樣品必須重檢。,實驗室質(zhì)量控制,室內(nèi)質(zhì)控品對照1、可采用商用質(zhì)控品或自制質(zhì)控品。質(zhì)控品應(yīng)包含抗體陽性 樣品和陰性樣品。不能使用酶聯(lián)試驗的外部質(zhì)控品。

18、 更換試劑批號 更換檢測人員2、下列情況需做質(zhì)量控制 更換包裝 更換廠家

19、 3、建議：每個檢測日檢測一次陽性和陰性質(zhì)控品；如果日檢測量大于50份樣品，至少應(yīng)做2次質(zhì)控。,,實驗室檢測策略,窗口期：從HIV感染人體到感染者血清中的抗體、抗原或核酸等感染標志物能被檢測出之前的時期。（在窗口期內(nèi)的血液已有感染性?，F(xiàn)有診斷技術(shù)檢測HIV抗體、抗原和核酸的窗口期分別為感染后的3周、2周和1周左右。）HIV抗體篩查試驗：初步了解機體血液或體液中有無HIV 抗體的檢測方法，也

20、包括同時檢測抗體和抗原的方法。HIV補充試驗：在獲得篩查試驗結(jié)果后，為了準確判斷，繼續(xù)檢測機體血液或體液中有無HIV抗體或核酸的方法，包括抗體確證試驗和核酸試驗。,實驗室檢測策略,實驗室檢測策略,使用抗體檢測試劑的篩查檢測流程（三代試劑）,試劑1,有反應(yīng),無反應(yīng),兩種試劑,均有反應(yīng)一有，一無,均無反應(yīng),補充試驗,報告HIV抗體陰性,實驗室檢測策略,使用抗原抗體檢測試劑的篩查流程（四代試劑）,抗原抗體檢測試劑,有反應(yīng),抗體檢測,均有反

21、應(yīng)一有，一無,補充試驗,均無反應(yīng),HIV-1核酸試驗或P24抗原試驗或2~4周后隨訪,無反應(yīng),報告HIV抗體陰性，P24抗原陰性,HIV感染/AIDS的診斷,診斷原則 以實驗室檢測為依據(jù)，結(jié)合臨床表現(xiàn)和參考流行病學資料綜合進行。HIV抗體和病原學檢測是確診HIV感染的依據(jù)；流行病學史是診斷急性期和嬰幼兒HIV感染的重要參考；CD4+T淋巴細胞檢測和臨床表現(xiàn)是HIV感染分期診斷的主要依據(jù)；AIDS的指征性疾病是

22、AIDS診斷的重要依據(jù)。,HIV感染/AIDS的診斷,HIV感染的診斷成人、青少年及18個月以上兒童符合下列一項即可診斷：HIV抗體篩查試驗有反應(yīng)和HIV抗體確證試驗陽性；HIV抗體篩查試驗有反應(yīng)和核酸定性試驗陽性；HIV抗體篩查試驗有反應(yīng)和核酸定量試驗>5000cps/ml；有流行病學史或艾滋病相關(guān)臨床表現(xiàn)，兩次HIV核酸檢測均為陽性；HIV分離試驗陽性。,HIV感染/AIDS的診斷,18個月齡及以下兒童符合下列一項

23、即可診斷：為HIV感染母親所生和兩次HIV核酸檢測均為陽性（第二次檢測需在出生4周后采樣進行）；有醫(yī)源性暴露史，HIV分離試驗結(jié)果陽性或兩次HIV核酸檢測均為陽性；為HIV感染母親所生和HIV分離試驗陽性。,HIV感染/AIDS的診斷,AIDS的診斷成人及15歲（含15歲）以上青少年符合下列一項即可診斷：HIV感染和CD4+T淋巴計數(shù)<200/mm3 ；HIV感染和伴有至少一種成人AIDS指征性疾病。,HIV感染/AI