探針標記

1、核酸探針已被廣泛用于篩選重組克隆、基因多樣性的種性檢測和真菌種群內及種群之間的系統發(fā)育關系評價。最早使用的放射性同位素標記核酸探針具有敏感性高、特異性好、分辨力強的特點，但放射性同位素標記也存在著一系列令人困擾的問題如成本高、探針半衰期短、放射性物質危害人體健康等。而且在進行放射性同位素標記實驗時需要有專門的實驗室及相應的實驗保護設施，還需要由經過培訓的專業(yè)人員來操作因而限制了在普通實驗室進行分子生物學實驗。近幾年發(fā)展起來的非放射性核酸

2、探針大多通過酶促、光化學和化學手段摻入一種報道基團這種報道基團可通過高靈敏度的冷光、熒光或金屬沉淀等檢測系統檢測。另外應用pH電極或感應器技術的電化學檢測系統也有報道。在這些檢測系統中靈敏度最高的是生物素親合素檢測系統和半抗原抗半抗原地高辛檢測系統。由于生物樣品中常含有內源性生物素及生物結合蛋白，生物素標記的核酸探針會發(fā)生一些非特異性結合，從而影響實驗效果。與生物素親合素系統同樣具有高靈敏度，卻減少了非特異性結合的地高辛檢測系統，已為人

3、們所接受并得到廣泛的應用。地高辛(DigoxigeninDIG)又稱異羥基洋地黃毒甙元，是一種類固醇半抗原分子。第四節(jié)非放射性標記的核酸探針方法稱為缺口平移法。用標記在DNA上的生物素與鏈霉親合素酶（過氧化物酶或堿性磷酸酶）標記物進行檢測。缺口平移法標記生物素DNA探針：在硅化Eppendf管（放入冰浴中）加下列反應液：待標記DNA0.1μgμl5μl10NTB1μlDNaseI2pgμl1μl消毒三蒸水3μl總體積達10μl混勻，37