高效液相色譜儀(hplc)校正方法

1、高效液相色譜儀（高效液相色譜儀（HPLC）校正方法）校正方法0.10.1輸液系統：輸液系統：0.1.10.1.1梯度誤差梯度誤差GC不超過不超過3%3%0.1.20.1.2泵流量設定值誤差泵流量設定值誤差Ss＜2%2%0.1.30.1.3流量穩(wěn)定性誤差流量穩(wěn)定性誤差SR＜2%2%0.20.2紫外檢測器性能紫外檢測器性能0.2.10.2.1基線噪聲不超過基線噪聲不超過51051044AUAU，基線漂移不超過，基線漂移不超過51051033

2、AUAU0.2.20.2.2定量測量重復性誤差（定量測量重復性誤差（6次進樣）次進樣）RSD≤1.5%RSD≤1.5%0.2.30.2.3最小檢測濃度不超過最小檢測濃度不超過11011077gmlgml萘甲醇溶液甲醇溶液0.2.40.2.4可調波長紫外可見光檢測器波長示值不超過可調波長紫外可見光檢測器波長示值不超過2nm(HP11002nm(HP1100高效液相色譜儀可由儀器自身完成高效液相色譜儀可由儀器自身完成)1校正條件校正條件1.

3、11.1環(huán)境溫度環(huán)境溫度1030℃1030℃，相對濕度低于，相對濕度低于65%65%1.21.2校正設備校正設備1.2.11.2.1秒表秒表分度值小于分度值小于0.10.1s1.2.21.2.2分析天平分析天平最大稱量最大稱量200g200g最小分度值最小分度值0.1mg0.1mg1.2.31.2.3容量瓶容量瓶1.2.41.2.4微量注射器微量注射器1.31.3標準物質和試劑標準物質和試劑1.3.11.3.1HPLCHPLC用甲醇、純

4、水，分析純的丙酮用甲醇、純水，分析純的丙酮1.3.21.3.211011044gmlgml，11011077gmlgml的萘甲醇溶液的萘甲醇溶液1.3.31.3.3紫外波長標準溶液紫外波長標準溶液2校正方法校正方法2.12.1梯度誤差梯度誤差GC的校正的校正2.1.12.1.1進行梯度洗脫程序，進行梯度洗脫程序，A溶劑為水，溶劑為水，B溶劑為溶劑為0.1%0.1%丙酮的水溶液，丙酮的水溶液，B經5個階段從個階段從0變到變到100%100

5、%，20%20%—40%40%—60%60%—80%80%—100%100%，重復測量兩次，取平均值，求各段梯度誤差，重復測量兩次，取平均值，求各段梯度誤差GciGci，取最大作為儀器，取最大作為儀器梯度誤差，公式：梯度誤差，公式：Gci=Gci=（LiLi—LmLm）Lm100%Lm100%LiLi：第：第i段信號值的平均值；段信號值的平均值；LmLm：各段輸出信號平均值的平均值：各段輸出信號平均值的平均值可接受標準：可接受標準：3%

6、≤Gci≤3%3%≤Gci≤3%2.22.2泵流量設定值誤差泵流量設定值誤差SsSs、流量穩(wěn)定性誤差、流量穩(wěn)定性誤差SR的校正的校正2.2.12.2.1將儀器的輸液系統、進樣器、色譜柱和檢測器聯接好，以甲醇為流動相，按表一設定流量，待將儀器的輸液系統、進樣器、色譜柱和檢測器聯接好，以甲醇為流動相，按表一設定流量，待流速穩(wěn)定后，在流動相排出口用事先清洗稱重過的容量瓶收集流動相，同時用秒表計時，準確的收集流速穩(wěn)定后，在流動相排出口用事先清洗

7、稱重過的容量瓶收集流動相，同時用秒表計時，準確的收集RSDRSD=[∑[∑（XiXiX）2]]（n1n1）(1(1X)100%)100%I=1I=1RSDRSD：相對標準偏差（：相對標準偏差（%）；）；n：測量次數；：測量次數；XiXi：第：第I次測量的峰面積次測量的峰面積X–n次進樣的峰面積算術平均值次進樣的峰面積算術平均值可接受標準：可接受標準：RSD≤1.5%RSD≤1.5%2.62.6波長示值誤差波長示值誤差2.6.12.6.1

8、用注射器將紫外波長標準溶液（標準波長為用注射器將紫外波長標準溶液（標準波長為235nm235nm，257nm257nm，313nm313nm和350nm350nm）從檢測器入）從檢測器入口注入樣品池沖洗，并將池充滿，將波長調到低于標準波長口注入樣品池沖洗，并將池充滿，將波長調到低于標準波長5nm5nm處，到標準波長處，到標準波長4nm4nm處，測得的最大吸處，測得的最大吸收值處對應的波長與標準波長之差為波長示值誤差；目前儀器可以在收值處

9、對應的波長與標準波長之差為波長示值誤差；目前儀器可以在1mlmin1mlmin的流量下，直接用空管連的流量下，直接用空管連接檢測器，每隔接檢測器，每隔2min2min改變改變1nm1nm，連續(xù)進標準樣，連續(xù)進標準樣10ul10ul，同樣可得波長示值誤差。，同樣可得波長示值誤差。2.6.22.6.2可調波長紫外可見光檢測器波長示值誤差可調波長紫外可見光檢測器波長示值誤差(此項只適用于此項只適用于HP1100HP1100高效液相色譜儀且?guī)в?/p>

10、高效液相色譜儀且?guī)в蠬PHP工作站作站)。2.6.32.6.3打開打開HP1100HP1100液相色譜儀和液相色譜儀和HPHP工作站，打開輸液泵和檢測器，用純水沖洗系統直至穩(wěn)定，進入工作站，打開輸液泵和檢測器，用純水沖洗系統直至穩(wěn)定，進入DiagnosisDiagnosis窗口，點擊氘燈圖標，進入窗口，點擊氘燈圖標，進入showshowmodulemoduleteststests狀態(tài)，點擊狀態(tài)，點擊VWDVWDVLVLcalibrati

11、oncalibrationtesttest點擊點擊startstart，系統自動進入校正狀態(tài)，待校正完畢，將校正結果打印歸檔。，系統自動進入校正狀態(tài)，待校正完畢，將校正結果打印歸檔。2.6.42.6.4可接受標準：可接受標準：λ≤2nmλ≤2nm3性能確認性能確認3.13.1使用標準品或供試品，確認儀器性能符合使用要求；使用標準品或供試品，確認儀器性能符合使用要求；3.23.2先進行色譜柱的性能確認，內容包括：分離度，對稱因子，理論塔板

12、數和峰面積標準偏差。先進行色譜柱的性能確認，內容包括：分離度，對稱因子，理論塔板數和峰面積標準偏差。3.33.3液相色譜柱的確認液相色譜柱的確認3.3.13.3.1測試標準樣配制：稱量測試標準樣配制：稱量1000mg1000mg苯酚，苯酚，100mg100mg聯苯加入到聯苯加入到100ml100ml容量瓶中，移入鄰苯二甲酸二容量瓶中，移入鄰苯二甲酸二甲酯、鄰苯二甲酸二乙酯各甲酯、鄰苯二甲酸二乙酯各1ml1ml，然后用甲醇定容到，然后用甲

13、醇定容到100ml100ml，混勻，從中移取，混勻，從中移取1ml1ml該溶液，用乙腈：水該溶液，用乙腈：水=70=70：3030定容至定容至100ml100ml。3.3.23.3.2方法：流動相為乙腈：水方法：流動相為乙腈：水=70=70：3030，流速為，流速為1.0mlmin1.0mlmin波長為波長為254nm254nm溫度為溫度為30℃30℃，進樣量為：，進樣量為：10ul10ul運行運行10min10min。3.3.33.3

14、.3色譜柱：色譜柱：ExtendC18ExtendC18AnalyticalAnalytical5um4.6250mm5um4.6250mm。3.3.43.3.4連續(xù)進行連續(xù)進行5次分析，分離度均次分析，分離度均R＞1.51.5；鄰苯二甲酸二乙酯對稱因子；鄰苯二甲酸二乙酯對稱因子S在0.800.80～1.501.50范圍范圍內；鄰苯二甲酸二乙酯柱效＞內；鄰苯二甲酸二乙酯柱效＞3000m3000m11；鄰苯二甲酸二乙酯峰面積的標準偏差應；

15、鄰苯二甲酸二乙酯峰面積的標準偏差應≤1.5%≤1.5%。3.43.4按照性能確認方法逐步進行，并記錄譜圖；按照性能確認方法逐步進行，并記錄譜圖；根據性能測試的結果，評價儀器是否符合性能要求。根據性能測試的結果，評價儀器是否符合性能要求。4校正結果處理和校正周期校正結果處理和校正周期4.14.1校正結果全部項目均符合技術要求者，判為合格，方可使用。若某些指標達不到要求，關于儀校正結果全部項目均符合技術要求者，判為合格，方可使用。若某些指標