細胞化學染色

1、,過碘酸-雪夫反應 periodic acid-Scheff reaction PAS,原理,過碘酸是氧化劑，能使含有乙二醇基的多糖類物質（糖原、黏多糖、黏蛋白、糖蛋白及糖脂等）氧化，形成雙醛基。醛基與雪夫試劑中的無色品紅結合，使無色品紅變成紫紅色化合物，定位于多糖類的細胞內。,乙二醇基 雙醛基,,過碘酸氧化,,血夫試劑中的無色品紅,紫紅色化合物,粒細胞系統(tǒng)

2、 分化差的原始粒細胞陰性，分化好的原始粒細胞至中性分葉粒細胞呈陽性，隨著細胞成熟陽性增強。 嗜酸性粒細胞顆粒本身不著色，顆粒間胞質紅色，是堿性粒細胞反之。,正常細胞的染色反應,紅細胞系統(tǒng)： 陰性 單核細胞系統(tǒng)：分化差的原始單核陰性，其它陽性。 淋巴細胞系統(tǒng)：大多數(shù)陰性，少數(shù)陽性（陽性率常<20%） 巨核細胞系統(tǒng)：巨核細胞和血小板呈陽性，陽性反應程度隨成熟增強。 其他細胞：少數(shù)

3、漿細胞陽性，巨噬細胞可呈陽性。,1.紅細胞系統(tǒng)疾?。?紅血病、紅白血病、骨髓增生異常綜合征中有核紅細胞呈陽性。 缺鐵性貧血、地中海貧血、巨幼細胞性貧血、再障有核紅細胞呈陰性。,臨床意義,2.白細胞系統(tǒng)疾?。?主要用于輔助鑒別急性白血病的細胞類型。 急性巨核細胞白血?。翰糠志藓思毎赎栃?，呈粗顆粒狀、小塊狀、或彌散分布。 急性粒細胞白血病:部分原始粒細胞呈陽性，呈細顆粒狀或彌散分布,急性淋

4、巴細胞白血病粗顆粒狀或小塊狀 急性單核細胞白血病有時胞質邊緣顆粒較粗大 慢性淋巴細胞白血病時淋巴細胞陽性率增加，呈粗顆粒狀或小塊狀,戈謝細胞呈陽性，尼曼-皮克細胞呈陰性。 RS細胞陰性或弱陽性，骨髓轉移性腺癌呈強陽性。,酯酶染色,分為特異性酯酶染色和非特異性酯酶染色,特異性酯酶染色：氯乙酸AS-D萘酚酯酶染色。非特異性酯酶染色：酸性非特異性酯酶染色（酸性ɑ-醋酸萘酚酯酶染色）、堿性非特異性酯酶染色（ɑ-丁酸萘

5、酚酯酶）和中性非特異性酯酶染色（ɑ-醋酸萘酚酯酶染色、醋酸AS-D萘酚酯酶染色）,氯乙酸AS-D萘酚酯酶染色naphthol AS-D chloroacetate esteraseNAS-DCE,原理,血細胞內的氯乙酸AS-D萘酚酯酶水解基質液中的氯乙酸AS-D萘酚，產生AS-D萘酚，進而與基質液中的重氮鹽偶聯(lián)形成不溶性的有色沉淀，定位于細胞內酶所在部位。本實驗常用重氮鹽為堅牢紫醬GBC，形成有色沉淀為紅色。,原理： 氯乙酸A

6、S-D AS-D萘酚 萘酚,,氯乙酸AS-D 萘酚酯酶,監(jiān)牢紫醬GBC,,不溶性 沉淀,正常血細胞染色粒細胞系統(tǒng) 分化差的原始粒細胞陰性，分化好的原始粒細胞至成熟粒細胞呈陽性。 嗜酸性粒細胞呈陰性或弱陽性，嗜堿性粒細胞呈陽性。,單核細胞系統(tǒng):絕大多數(shù)為陰性，僅個別單核細胞系統(tǒng)細胞呈弱陽性。 其他細胞：如淋巴細胞、漿細胞、巨核細胞、有核紅

7、細胞、血小板等均呈陰性，肥大細胞陽性。,臨床意義,主要用于輔助鑒別診斷急性白血病細胞的類型，是急性白血病的常規(guī)細胞化學染色。 1.急性粒細胞白血病時原始粒細胞呈陰性或陽性，所以染色結果為陰性者不能排除急粒的可能。,2.急性早幼粒細胞白血病早幼粒細胞呈強陽性。 3.急性單核細胞白血病時原始單核細胞及幼稚單核細胞幾乎均呈陰性，個別弱陽性。 4.急性粒-單核細胞白血病時原始粒細胞及早幼粒細胞呈陽性，原始單

8、核細胞及幼稚單核細胞呈陰性。,5.急性淋巴細胞白血病和急性巨核細胞白血病均呈陰性,應用評價,NAS-DCE是粒細胞的特異酯酶，它是急性白血病形態(tài)分型時常規(guī)做的細胞化學染色，尤其有助于POX染色陽性的急粒急單的鑒別。 該實驗敏感性較POX低，如有一定數(shù)量白血病細胞NAS-DCE染色呈陽性，可以肯定其中粒系成分的存在，陰性則不能排除有粒系成分的可能。,ɑ-醋酸萘酚酯酶染色 ɑ-naphthol acetate esterase

9、 ɑ-NAE,原理,ɑ-醋酸萘酚酯酶存在于單核細胞、粒系細胞和淋巴細胞中，是一種中性非特異性酯酶。血細胞內的ɑ-NAE在PH中性條件下，水解基質中的ɑ-醋酸萘酚釋放出ɑ-萘酚，進而與基質液中的重氮鹽偶聯(lián)形成不溶性有色沉淀，定位于細胞內酯酶所在部位。 單核細胞系統(tǒng)可被氟化鈉抑制，所以做ɑ-NAE時，需要同時做氟化鈉抑制試驗。,ɑ醋酸萘酚 ɑ萘酚,,ɑ醋酸萘酚酯酶

10、,水解,重氮鹽,,不溶性有色沉淀,正常血細胞染色,單核細胞系統(tǒng)：分化差的原始單核細胞呈陽性，分化好的原始單核細胞呈陽性，幼稚單核及單核細胞呈陽性，可被氟化鈉抑制。所謂抑制是指氟化鈉實驗的抑制率大于50%。 抑制前陽性率或陽性積分-抑制后陽性率或陽性積分氟化鈉抑制率= 前抑制陽性率或陽性積分,粒細胞系統(tǒng)：陰

11、性或陽性，但不能被氟化鈉抑制。 淋巴細胞系統(tǒng)：多屬陰性，少數(shù)弱陽性，陽性反應不能被氟化鈉抑制。 其他細胞：巨核細胞和血小板呈陽性，陽性反應不能被氟化鈉抑制；少數(shù)有核紅細胞呈弱陽性，陽性反應不能被氟化鈉抑制。,臨床意義,主要用于 輔助鑒別急性白血病的類型： 1.急性單核細胞白血病中的細胞大多數(shù)呈陽性且較強，陽性反應能被氟化鈉抑制。 2.急性粒細胞白血病中的原始粒細胞呈陰性

12、或陽性，陽性反應不能被氟化鈉抑制。3.急性早幼粒細胞白血病中的早幼粒細胞呈強陽性，陽性反應不被氟化鈉抑制。,4.急性淋巴細胞白血病中的原始淋巴細胞及幼稚淋巴細胞呈陰性至陽性，不被氟化鈉抑制。5.急性粒單核細胞白血病中的原始粒細胞呈陰性至陽性。反應不被氟化鈉抑制；原始單核及幼稚單核細胞呈陽性且較強，陽性反應能被氟化鈉抑制。,應用評價,ɑ-NAE染色是急性白血病形態(tài)學分型時常規(guī)要做的細胞化學染色，對單核細胞白血病與粒細胞白血病鑒別診斷意

13、義較大。一般來說，ɑ-NAE在急性單核細胞白血病細胞中的陽性較強，但M3或M2b也可呈強陽性。,醋酸AS-D萘酚酯酶染色,naphthol AS-D acetate esterase NAS-DAE,原理,NAS-DAE存在于單核細胞、粒細胞和淋巴細胞中，是一種中性非特異性酯酶。 血細胞內的 NAS-DAE在pH中性的條件下水解基質液中的醋酸AS-D萘酚，釋放出AS-D萘酚，進

14、而與基質液中的重氮鹽偶聯(lián)成不溶性的有色沉淀定位于細胞質內酶所在的部位。,正常細胞的染色反應,粒細胞系統(tǒng)中，原始粒細胞陰性或陽性，早幼粒細胞至成熟粒細胞均陽性，陽性反應不被氟化鈉抑制，其他血細胞染色基本同ɑ-NAE染色。,臨床意義,基本同ɑ-NAE，用以輔助鑒別急性白血病細胞類型。,應用評價,基本同ɑ-NAE,ɑ-丁酸萘酚酯酶染色,ɑ-naphthol butyrate esterase ɑ-

15、NBE,實驗原理,ɑ-NBE主要存在于單核細胞中，是一種非特異性酯酶。血細胞中的ɑ-NBE在PH堿性條件下，水解基質內的ɑ-丁酸萘酚并釋放出ɑ-萘酚，后者與基質液中的重氮鹽偶聯(lián)形成不溶性有色沉淀，定位于胞質內酶所在的位置。,正常細胞染色反應,1.粒細胞系統(tǒng)：各階段粒細胞皆陰性。2.單核細胞系統(tǒng)：分化差的原始單核細胞呈陰性，分化好的原始單核細胞呈陽性，幼稚單核細胞及單核細胞呈陽性，陽性反應被氟化鈉抑制。,3.淋巴細胞系統(tǒng)：T淋巴細胞、

16、非T非B淋巴細胞可呈陽性，B淋巴細胞呈陰性。4.其他細胞：巨核細胞、有核紅細胞、漿細胞呈陰性或弱陽性，組織細胞也可呈陽性，但不被氟化鈉抑制。,臨床意義,與ɑ-NAE染色的臨床意義相同： 1.急性單核細胞白血病中的細胞大多數(shù)呈陽性，陽性反應能被氟化鈉抑制 2.急性粒細胞白血病中的原始粒細胞一般呈陰性 3.急性早幼粒細胞白血病中的早幼粒細胞常呈陰性,4.急性粒單核細胞白血?。簡魏讼挡糠职籽〖毎栃裕?/p>

17、系部分白血病細胞陰性。 5.急性淋巴細胞白血病中的原始淋巴細胞及幼稚淋巴細胞一般呈陰性。,酯酶雙染色,在同一張涂片上進行兩種酯酶染色的方法稱為酯酶雙染色。一般采用一種特異性酯酶染色加一種非特異性酯酶染色，故常用的有ɑ-醋酸萘酚酯酶與氯乙酸AS-D萘酚酯酶雙染色、ɑ-丁酸萘酚酯酶與氯乙酸AS-D萘酚酯酶雙染色等。,酸性磷酸酶染色,acid phosphatase ACP

18、,實驗原理,酸性磷酸酶（ACP）存在于細胞的溶酶體顆粒中，有些細胞中的酸性磷酸酶耐酒石酸，故抗酒石酸酸性磷酸酶染色有助于某些疾病的診斷和鑒別診斷。染色方法有偶氮偶聯(lián)法和Gomori硫化鉛法，前者常用。,偶氮偶聯(lián)法：血細胞內的酸性磷酸酶在酸性（pH5.0）條件下水解基質中的磷酸萘酚AS-BI，釋放出萘酚AS-BI，后者與基質中的重氮鹽偶聯(lián)形成不溶性的有色沉淀，定位于細胞之內酶所在的部位。,抗酒石酸酸性磷酸酶染色：用相同的方法制備兩份基質液

19、，一份加入適量的L-酒石酸（左旋酒石酸），另一份不加酒石酸。取同一份骨髓標本的兩張涂片，分別用這兩種不同的基質液做酸性磷酸酶染色。如果血細胞內的酸性磷酸酶耐酒石酸，兩張均呈陽性；如不耐酒石酸，不加L-酒石酸呈陽性反應，二甲L-酒石酸呈陰性反應。,正常細胞染色反應,粒細胞、單核細胞、淋巴細胞、巨核細胞、血小板、漿細胞、巨噬細胞呈陽性。,臨床意義,1.多毛細胞白血病呈陽性（長強陽性），陽性反應不被L-酒石酸抑制。慢性淋巴細胞白血病的淋巴細胞

20、和惡性淋巴瘤細胞ACP染色也可呈陽性，但被L-酒石酸抑制。 2、戈謝細胞陽性，尼曼匹克細胞陰性。 3、T淋巴細胞陽性，B淋巴細胞陰性。,應用評價,ACP染色在多毛細胞白血病中最具特征性，所以主要用于多毛細胞白血病的診斷，其次是在戈謝病和尼曼匹克病應用。這些疾病在臨床上均很少見，故常因為標本過少而導致試劑過期。,組織化學染色小結,在急性髓系白血病骨髓中，以原始和幼稚細胞增生為主，僅僅根據(jù)瑞氏染色下的細胞形態(tài)容易做出錯誤判斷