三株阿維菌素高效降解菌的篩選、鑒定及降解特性研究.pdf

1、本研究建立了無機鹽培養(yǎng)基及土壤中阿維菌素含量的HPLC檢測方法,篩選出了三株能高效降解阿維菌素的細菌,并對這三株細菌的降解特性進行研究。
　　 培養(yǎng)基或土壤樣品采用乙腈為阿維菌素提取劑,以甲醇:水(92:8,V/V)為流動相,在波長250nm,柱溫30℃,流速1.0mL/min的條件下進行HPLC分析。所建立方法在1-80mg/L范圍內(nèi)線性關系良好。在1、10、50mg/L三個添加水平,阿維菌素在培養(yǎng)基中的平均回收率在85％以上

2、,日內(nèi)、日間變異系數(shù)低于5％;在土壤中的平均回收率在90％左右,日內(nèi)變異系數(shù)低于3％,日間變異系數(shù)低于5％。阿維菌素在培養(yǎng)基中的檢測限(LOD)為0.5mg/L,定量限(LOQ)為1mg/L。
　　 以無機鹽培養(yǎng)基作為限制性條件構建細菌篩選模型,經(jīng)過初步篩選、分離、純化、馴化、復篩等步驟最終篩選出三株阿維菌素高效降解菌,結(jié)合革蘭氏染色鏡檢和分子生物學16S rDNA鑒定,確定細菌分別為枯草芽孢桿菌、粘質(zhì)沙雷氏菌和蠟樣芽孢桿菌,試

3、驗中分別命名為G1、G6和G10。
　　 研究包括pH值、溫度、裝樣量、底物濃度、細菌接種量、外加碳氮源和金屬離子對這三株細菌阿維菌素降解能力及生長量的影響,最終確定了各細菌的最佳降解條件:G1在pH值為6、35℃、裝樣量80mL、細菌接種濃度0.1％、底物濃度100mg/L、添加0.2％的蔗糖和酵母浸液及0.1％的Fe3+和Cu2+的條件下阿維菌素降解速率最高;G6在pH值為6、40℃、裝樣量40mL、細菌接種濃度0.05％、

4、底物濃度150mg/L、添加0.2％的蔗糖和牛肉膏及0.1％的Fe3+和Cu2+的條件下阿維菌素降解速率最高;G10在pH值為6、40℃、裝樣量120mL、細菌接種濃度0.1％、底物濃度150mg/L、添加0.2％的淀粉和酵母浸液及0.1％的Fe3+和Cu2+的條件下阿維菌素降解速率最高。
　　 將三株細菌在試驗室進行土壤模擬降解試驗,試驗分滅菌土壤組和非滅菌土壤組,并選擇10mg/kg、25mg/kg和50mg/kg三個濃度進