一株綠粘帚霉對植物病原菌的拮抗作用及抗菌活性成分分離鑒定.pdf

1、本研究以安徽農業(yè)大學微生物防治省級重點實驗室的一株具有較高抑菌活性的綠粘帚霉RCEF4099菌株的次生代謝產物為研究對象，系統(tǒng)研究了RCEF4099菌株發(fā)酵液的抗菌活性與抗菌成分。主要內容包括：菌株部分生物學指標測定；抑菌試驗；有利于活性成分產生的發(fā)酵條件優(yōu)化；菌株抑菌機理初探；室內盆栽試驗；活性物質的分離與結構鑒定。
　　 對RCEF4099菌株的生長速度和幾丁質酶活性進行了測定。通過測定菌株RCEF4099的直徑，可以看出菌

2、落的生長速度較快，其中第四天的生長速度最快，第五天直徑即達到了9cm。共測定8天菌株RCEF4099的幾丁質酶活性，幾丁質酶在第2天開始表達，第7天達到高峰，之后開始下降。
　　 綠粘帚霉菌株RCEF4099分別與辣椒灰霉、小麥赤霉、玉米小斑、小麥紋枯、棉花枯萎、蘋果炭疽、油菜菌核、水稻紋枯8種植物病原真菌進行對峙試驗和杯碟法抑菌試驗。綜合兩種抑菌實驗方法，得出綠粘帚霉RCEF4099對辣椒灰霉的抑菌效果最好。
　　 本

3、研究以抑菌活性為指標（抑菌圈大小），比較不同的營養(yǎng)性因素包括碳氮源、無機鹽及不同的非營養(yǎng)因素包括種齡、接種量、裝液量、搖瓶的轉速對活性物質產生的影響，最終篩選出RCEF4099菌株產生抗菌活性物質的最佳發(fā)酵條件如下：RCEF4099在裝液量40/100 ml（V/V），接種量10％（V/V），培養(yǎng)時間5d，搖床轉速160 r/min時活性最強；發(fā)酵培養(yǎng)基的成分為：4％葡萄糖、0.5％白砂糖、1.5％干酵母、0.02％K2HPO4。

4、>　　 對RCEF4099菌株發(fā)酵液的穩(wěn)定性測定結果表明菌株轉接6代之前，活性穩(wěn)定，第10代的抑菌圈直徑僅比出發(fā)菌株減少了1.7mm。RCEF4099菌株發(fā)酵液有較好的熱穩(wěn)定性和酸堿穩(wěn)定性。
　　 通過粘帚霉發(fā)酵液對辣椒灰霉的孢子和菌絲生長形態(tài)兩方面的影響來探尋綠色粘帚霉RCEF4099的抑菌機理。RCEF4099菌株的代謝產物對辣椒灰霉病菌孢子的萌發(fā)有極強的抑制作用，經處理后孢子萌發(fā)畸形的比率較高，對病原菌的菌絲也同樣有致畸

5、作用。
　　 室內盆栽實驗結果表明：RCEF4099菌株發(fā)酵液對辣椒灰霉病有較高的保護和治療作用，預防作用和治療作用都在76％以上。
　　 通過比較不同提取方法的處理及相關理化試驗，確立了活性物質的最佳提取工藝為：發(fā)酵液50℃濃縮至原體積的1/5，加入3倍體積95％乙醇（乙醇終濃度為75％）醇沉兩次，棄沉淀并脫醇后，以丙酮為萃取試劑，按2：1的體積比分兩次萃取，取丙酮相，濃縮至干，即得到活性物質的粗提品。