球孢白僵菌α-葡萄糖苷轉運蛋白(BbATG1)的功能分析與熱激響應基因的分離鑒定.pdf

1、球孢白僵菌對環(huán)境溫度變化的響應，是影響其孢子制劑對田間害蟲防治效果穩(wěn)定性的關鍵因素之一。本研究開展了球孢白僵菌抗逆相關基因BbAGT1編碼的α-葡萄糖苷轉運蛋白的功能分析，并對該菌熱激響應相關基因進行了分離篩選，主要結果如下：
　　 球孢白僵菌BbAGT1基因克隆、敲除及功能分析從球孢白僵菌Bb2860菌株中克隆了BbAGT1基因，該基因全長1883 bp，含四個外顯子和三個內含子，編碼565個氨基酸，編碼蛋白的預測分子量為63

2、.65 kDa，等電點約為5.52。BbAGT1擁有MFS轉運蛋白家族的底物結合位點，與21種已知真菌的α-葡萄糖苷轉運蛋白的同源性高達90‰-99％。通過根癌農桿菌介導的真菌轉化方法構建使該基因缺失的敲除菌株，經PCR及Southern雜交鑒定后進行表型分析。結果顯示，同野生株相比，基因敲除株△BbAGT1的孢子萌發(fā)速率、菌絲生長和產孢量分別下降66％、64％及90％，分生孢子抗氧化、耐48。C高溫脅迫、耐UV-B紫外輻射的能力以及對

3、蚜蟲的毒力分別下降27％、22％、28％及14％。由此證明，BbAGT1基因在球孢白僵菌抗逆力及侵染力的利用過程中起到了重要的作用。
　　 球孢白僵菌熱激響應基因的篩選采用抑制消減雜交技術構建Bb2860菌株熱脅迫下的差異表達cDNA文庫，從中篩選出28個熱激響應上調基因。通過比對分析，大部分基因與已知功能基因如物質運輸、基礎代謝及脅迫響應類基因具高度同源性。運用熒光實時定量PCR測定其中的12個基因在40℃熱激15、30、60