紅提葡萄白腐病拮抗微生物的選育及生物防治的應(yīng)用.pdf

1、目前，白腐病已成為我國紅提葡萄生產(chǎn)中最嚴(yán)重的病害之一，在我國各紅提葡萄主要產(chǎn)區(qū)均有發(fā)生，且其發(fā)病率逐年上升，直接影響紅提葡萄的質(zhì)量和產(chǎn)量，危害巨大。
　　 本研究對廣譜拮抗菌株P(guān)T2進(jìn)行了菌株分類鑒定、拮抗菌株對病原菌的抑制作用、菌株的復(fù)合誘變選育、混合菌種發(fā)酵研究、工業(yè)發(fā)酵培養(yǎng)基優(yōu)化、田間防治等紅提葡萄白腐病生物防治關(guān)鍵技術(shù)進(jìn)行了系統(tǒng)地研究，以期為紅提葡萄白腐病的生物防治提供理論依據(jù)和奠定應(yīng)用基礎(chǔ)，旨在探索一條綠色、高效、可持

2、續(xù)的紅提葡萄白腐病病害防治途徑。
　　 通過形態(tài)學(xué)觀察、生理生化試驗(yàn)以及16SrRNA序列分析等手段，對廣譜拮抗菌株P(guān)T2進(jìn)行分類鑒定，確認(rèn)其為一株枯草芽孢桿菌。做PT2對白腐病菌的平板拮抗試驗(yàn)來初步確定其拮抗范圍。采用紫外線、He-Ne激光及二者復(fù)合誘變的方法，分別處理枯草芽孢桿菌PT2,以提高其抑菌效果。結(jié)果表明，紫外線和He-Ne激光單獨(dú)作用，所篩菌株UV10與HN14抑菌效果提高率分別為15.0％與21.7％。而經(jīng)過對復(fù)

3、合誘變條件確定，在紫外線照射90s后，再用15mw的He-Ne激光輻照10min，篩選出最佳正變菌株P(guān)T21，抑菌效果提高30.9％，明顯高于單因素誘變，經(jīng)25代傳代試驗(yàn)證明其拮抗能力可以進(jìn)行穩(wěn)定遺傳。
　　 將PT21與另一株具有廣譜拮抗性的枯草芽孢桿菌QM34進(jìn)行混合培養(yǎng)，包括平板交叉劃線、液體搖瓶培養(yǎng)等方法，觀察混合培養(yǎng)條件下生長量A660及拮抗能力的變化。結(jié)果表明，PT21與QM34能共存于同一生長環(huán)境，且二者在生長與拮

4、抗能力兩方面均出現(xiàn)互補(bǔ)提高的效應(yīng)。通過改進(jìn)玉米粉液體培養(yǎng)基成分配比，來摸索適合PT21與QM34混合培養(yǎng)的工業(yè)發(fā)酵培養(yǎng)基。綜合考慮生長量A660和抑菌圈φ兩個指標(biāo)，設(shè)計了L18(3)6正交表，通過極差分析和方差分析結(jié)果，得到了最優(yōu)發(fā)酵條件組合A2B2C2D2E1F2。
　　 根據(jù)專利《果渣發(fā)酵生產(chǎn)生化黃腐酸復(fù)合微生物菌肥技術(shù)》的研究，確定了多級發(fā)酵工藝，以蘋果渣作為原料，多級發(fā)酵生產(chǎn)優(yōu)質(zhì)生化黃腐酸復(fù)合微生物菌肥。將黃腐酸菌肥與拮