PtCBF轉化枳和椪柑及在枳和椪柑內的時空表達.pdf

1、柑橘經常受到凍害、干旱、鹽堿等環(huán)境因素的脅迫,嚴重阻礙了柑橘業(yè)的健康發(fā)展。因此,研究植物對環(huán)境脅迫的應答機制,利用基因工程手段提高植物的抗逆性,已成為柑橘業(yè)發(fā)展的關鍵性工作。
　　 CBF(C-repeat binding factor)是調控一系列植物冷馴化相關基因表達的轉錄因子,被低溫誘導表達,與相應順式作用元件CRT/DRE(C-repeat/dehydrationresponsive element)結合,誘導冷相關基因

2、的表達,進而合成抗寒相關的糖類、脯氨酸和膜穩(wěn)定蛋白等物質,提高植物的抗寒性。因此,利用CBF轉化柑橘有望成為培育柑橘抗寒新品種的有效途徑。
　　 本實驗室前人已經構建好CBF-GFP融合基因的農桿菌表達載體CG2301。本試驗旨將已經構建好的表達載體CG2301通過農桿菌介導轉入枳(Poncirus trifoliata(L.)Raf.)和椪柑(Citrus reticulata Blanc)。低溫處理轉基因植株,在熒光顯微鏡下

3、檢測轉基因苗的時空表達。
　　 主要試驗結果如下:
　　 1)CG2301的亞細胞定位:通過基因槍介導轉化洋蔥表皮細胞,熒光顯微鏡下檢測,熒光集中在細胞核上,表明PtCBF定位于細胞核。
　　 2)轉基因苗的獲得:融合基因表達載體CG2301通過農桿菌介導轉入枳和椪柑,獲得轉基因苗,其中一些轉基因苗進行了盆栽和擴繁。
　　 3)CBF基因的空間表達:4℃處理轉基因枳,根部比較敏感,15min后發(fā)出較強熒光

4、,而莖部和葉片背面發(fā)出較弱熒光。隨著處理時間的加長,葉片,莖部熒光表達逐漸增強,葉片正面的翼葉和三片復葉的連接處、葉柄和莖的連接處及幼葉的熒光表達較強。轉基因枳熒光發(fā)光部位并不是機械的均一,本試驗中并未發(fā)現整個植株或整個葉片全部發(fā)光的現象。熒光表達多發(fā)生在根、葉片等組織較薄的地方,而莖部表達相對較少?？购暂^枳殼弱的椪柑4℃處理后,有少量綠色熒光產生。其中,葉片背面主脈處、莖部熒光表達較強。
　　 4)CBF基因的時間表達:枳轉