沙冬青脫水素基因的克隆及對煙草的遺傳轉(zhuǎn)化.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、本論文成功克隆了耐旱植物沙冬青中的脫水素基因，構(gòu)建了植物表達載體并通過農(nóng)桿菌介導法將其導入煙草中，獲得了PCR檢測陽性的轉(zhuǎn)基因植株，為研究脫水素基因在轉(zhuǎn)基因植物中的表達奠定基礎。主要研究內(nèi)容與結(jié)果如下： 1、根據(jù)沙冬青脫水素基因cDNA序列設計特異引物，以沙冬青基因組DNA為模板進行特異性擴增，成功克隆了該脫水素基因。該基因全長1106bp，沒有內(nèi)含子，開放閱讀框長552bp，5'UTR98bp，3'UTR456bp，編碼一條1

2、83個氨基酸的多肽。 2、利用含有BstEⅡ和BglⅡ限制性內(nèi)切酶位點的特異引物從重組的克隆載體中PCR獲得目的片段，并將其定向插入到植物表達載體pCAMBIA3301的GUS表達區(qū)，獲得重組表達載體pCAMBIA3301—DHN，通過凍融法將此表達載體導入農(nóng)桿菌LBA4404中，提取轉(zhuǎn)化質(zhì)粒，經(jīng)PCR鑒定表明脫水素基因植物表達載體構(gòu)建成功。 3、以煙草無菌苗葉片為轉(zhuǎn)化受體材料，用攜帶脫水素基因的表達載體的根癌農(nóng)桿菌進行

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