柑桔抗?jié)儾》肿訕擞浐Y選.pdf

1、柑桔潰瘍病(Citrus Canker)是嚴重危害世界柑桔產業(yè)的一種細菌性病害，病原為地毯草黃單胞桿菌柑桔致病變種[Xanthomonas axonopodis pv．Citri(Xac)]。該病能感染大多數(shù)栽培柑桔品種，導致落葉、落果、樹勢衰弱、果實生銹斑和品質變劣，甚至樹體死亡。增加了生產成本、降低了商品價值。培育和利用抗?jié)儾〉母探燮贩N，是從根本上解決潰瘍病危害的有效而徹底的方法，但受到抗性機理研究不夠深入、常規(guī)育種轉移抗性基因面

2、臨多重困難，以及可利用外源抗性基因有限等因素的制約，目前柑桔抗?jié)儾∑贩N的培育，尤其是生產上大量栽培的甜橙、葡萄柚等敏感品種的改良仍進展甚微，迫切需要對潰瘍病抗性進行深入研究。分子標記技術為深入開展柑桔潰瘍病研究提供了一條途徑。 本試驗采用抗柑桔潰瘍病的宜昌橙2586×易感病的嶺南沙田柚F1代為試材，開展抗?jié)儾》肿訕擞浐Y選。首先，隨機選取80株F1代材料，在疫區(qū)進行潰瘍病田間接種鑒定，按標準5級抗性評價程序分級評價；其次，為了

3、與分子標記評價結果進行對照分析，將免疫和高抗類型作為抗性類型，中抗、中感和感病作為敏感類型進行簡化分析，并對該簡化分離結果進行卡方檢驗。隨后，根據(jù)集合分離分析法BSA(Bulked Segregant Analysis)，分別選取8個極端抗病單株和極端感病單株組建抗感基因池，通過SSR和SRAP等分子標記技術，建立適合柑桔的分子標記體系，開展與該病抗性相關的分子標記篩選。對基因池篩選獲得的差異引物組合，進行親本和抗感池個體的進一步鑒定，

4、鑒定的標記作為可能的抗性候選標記，并將該候選標記對鑒定的分離群體進行進一步驗證，將其結果與抗性鑒定結果進行相關分析，采用最大似然法計算遺傳距離。最后，為了更深入驗證所獲得的標記，選用生產上比較公認的潰瘍病抗感性類型材料，進行擴增檢測。通過上述研究，獲得以下主要研究結果： (1)田間抗性鑒定表明，宜昌橙2586×嶺南沙田柚的F1代材料抗性分離明顯，80株材料除2株死亡外。免疫(I)5株，高抗(HR)37株，中抗(MR)31株，中感

5、(MS)3株和高感(S)2株。簡化為抗感2級分析，有42株抗病，36株感病。經卡方檢驗，X2=0.16遠小于X20.05=3.84，抗感性狀分離符合1：1比例，表明此條件下該性狀的遺傳符合孟德爾規(guī)律。 (2)建立比較穩(wěn)定且適于BSA法標記篩選的柑桔SSR和SRAP擴增檢測體系，從285對SSR引物組合中篩選到26對在抗感基因池間表現(xiàn)多態(tài)性的引物，從360對SRAP引物組合中篩選到67對在抗感基因池間表現(xiàn)出多態(tài)性引物。 (

6、3)通過基因池個體驗證，從26對SSR多態(tài)性引物組合中找到了一個可能與柑桔潰瘍病抗性相關基因連鎖的標記，將其命名為CR14-110。該標記在8個抗病基因池單株和8個感病基因池單株及親本間表現(xiàn)與抗性相關的多態(tài)性。進一步對測試分離群體進行單株驗證，表現(xiàn)抗病的42個單株中，有3株未出現(xiàn)該特征片段：表現(xiàn)感病的36個單株中，有6株出現(xiàn)該特征片段。經CORREL函數(shù)相關分析，該標記與柑桔潰瘍病抗性的相關系數(shù)為0.79，采用最大似然法計算重組率為(9