輔酶Q-,10-生物合成關鍵酶基因DDSA的克隆及轉化水稻研究.pdf

1、輔酶Q10具有抗氧化，治療心血管疾病，抗腫瘤，延緩衰老和抗疲勞等諸多作用。隨著年齡的增長，人體內輔酶Q10的含量在20歲后就日趨減少，導致各種疾病的產(chǎn)生。水稻作為人類的主食，由于缺乏十聚異戊二烯焦磷酸合成酶(DDSA)，主要是合成輔酶Q9，而無法最終合成輔酶Q10。本研究利用基因工程手段將編碼輔酶Q10生物合成的關鍵基因。DDSA導入水稻中，使其在水稻胚乳中特異性高效表達，以培育出稻米含有輔酶Q10的水稻優(yōu)異新種質。主要研究結果如下：

2、 1、采用PCR方法，從弱氧化葡糖桿菌(Goxydans ATCC621)中分離克隆了輔酶Q10生物合成關鍵酶基因DDSA，該基因長度為948 bp，編碼315個氨基酸，蛋白質分子量約為33.9 KDa，在Genebank進行同源性比較，結果表明，克隆的基因與已報道的G.oxydans621的DDSA基因具有很高的相似性達99％，推導的氨基酸序列中具有聚異戊二烯焦磷酸合成酶典型的7個保守區(qū)域，表明克隆得到的DDSA基因可能具有編碼

3、十聚異戊二烯焦磷酸合成酶的能力。 2、以質粒載體pCAMBIA1301為基礎，分別將水稻谷蛋白基因啟動子Gt1、DDSA基因、NOS終止子依次插入到載體pCAMBIA1301的多克隆位點，從而構建得到能在水稻胚乳中特異性表達DDSA基因的植物表達載體pCAMBIA1301-Gt1-DDSA-NOS。 3、在上述基礎上，利用根癌農桿菌介導法，將含有DDSA基因的植物表達載體pCAMBIA1301-Gt1-DDSA-NOS導