豬精液4℃低溫保存技術(shù)的研究.pdf

1、由于豬精子結(jié)構(gòu)對(duì)溫度變化特別敏感,豬精液更適合液態(tài)保存。4℃的豬精液保存,溫度介于常溫和冷凍保存間,相較于常溫保存更久,較冷凍保存則更經(jīng)濟(jì)、便利。本研究擬對(duì)豬精液的低溫保存技術(shù)進(jìn)行系統(tǒng)、深入的研究,以期為豬人工授精提供技術(shù)支撐。
　　研究?jī)?nèi)容包括:
　　(一)低溫保存基礎(chǔ)稀釋液和處理方法的優(yōu)化、篩選:以“手握法”采集健康成年種公豬精液,用6種稀釋液稀釋后4℃低溫保存,以精子總存活時(shí)間、有效存活時(shí)間及存活指數(shù)為檢測(cè)指標(biāo),篩選最

2、優(yōu)基礎(chǔ)稀釋液配方,探討保存前不同精液處理方法在豬精液4℃低溫保存的效果;以最優(yōu)稀釋液和精液處理方法稀釋豬精液,4℃低溫保存2～3后用于低劑量常規(guī)部位人工授精試驗(yàn),依據(jù)受胎率來(lái)評(píng)價(jià)效果。結(jié)果表明:(1)6號(hào)稀釋液(葡萄糖-蔗糖-卵黃-慶大霉素-青霉素),稀釋保存精子的總存活時(shí)間長(zhǎng)達(dá)235.20 h,有效存活時(shí)間長(zhǎng)達(dá)129.60 h,存活指數(shù)92.57 h,顯著優(yōu)于其它5種(P<0.05);(2)精液帶精漿直接稀釋的效果優(yōu)于精液離心處理(P

3、<0.05);(3)精液以1:2或1:3比例稀釋更利于豬精液4℃低溫保存(P<0.05);(4)低劑量常規(guī)部位人工授精母豬受胎率達(dá)83.33％,受胎母豬分娩率100%,平均產(chǎn)仔數(shù)10.9頭,平均產(chǎn)活仔數(shù)9.9頭。
　　(二)4種抗氧化物對(duì)豬精液4℃低溫保存效果的影響:通過(guò)在豬精液低溫保存基礎(chǔ)稀釋液中添加不同濃度的水蛭素(0、0.50、1.00、1.50、2.00 mg·mL-1)、黃芪多糖(0、0.10、0.20、0.30、0.4

4、0 mg·mL-1)、茶多酚(0、0.50、1.00、1.50、2.00 mg·mL-1和L-精氨酸(0、0.50、1.00、1.50、2.00 mg·mL-1),采用碘化丙啶熒光染色檢測(cè)精子活率,計(jì)算機(jī)輔助精液分析儀檢測(cè)精子活力,Diff-Quik染色檢測(cè)精子畸形率,考馬斯亮藍(lán)染色檢測(cè)精子頂體完整率,低滲腫脹法檢測(cè)質(zhì)膜完整率,以研究4種抗氧化物對(duì)4℃低溫保存的豬精液品質(zhì)的影響。結(jié)果表明:在豬精液低溫保存基礎(chǔ)稀釋液中添加適宜濃度的水蛭素

5、、黃芪多糖、茶多酚和L-精氨酸,有利于維持精子在4℃低溫條件的活率和活力,降低精子畸形率,提高精子頂體和質(zhì)膜完整率,其最佳濃度分別為2 mg·mL-1、0.3mg·mL-1、1 mg·mL-1、1 mg·mL-1。
　　綜上所述,本課題研究通過(guò)試驗(yàn)篩選獲得豬精液低溫保存的最優(yōu)基礎(chǔ)稀釋液配方和精液低溫保存前處理方法;驗(yàn)證了用低溫保存的豬精液進(jìn)行低劑量常規(guī)部位人工授精的可行性;證實(shí)了4種抗氧化物在適宜濃度下對(duì)豬精液4℃低溫保存起顯著的