雞貧血病毒感染性克隆的構建及LAMP快速檢測方法的建立.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、雞傳染性貧血病毒(Chicken anemia virus,CAV)是引起雞傳染性貧血?。–hicken infectious anemia,CIA)的病原,屬圓環(huán)病毒科(Circoviridae)。CAV基因組編碼三種蛋白:VP1(51.6kD)、VP2(24kD)和VP3(13.6kD),其中VP3(Apoptin)可以誘導細胞凋亡。
   本文通過基因突變技術將CAV的基因序列第487nt處的T改變?yōu)镃,第526nt處的C

2、改變?yōu)門,從而使VP3的起始密碼子移位到原第14氨基酸的位置。突變后的VP3缺失了39個堿基,造成VP3的不完全表達;而相同堿基位置的VP2編碼的氨基酸不變,因此不會影響VP2的表達。本研究還通過引物設計,將CAV病毒非編碼區(qū)不完整的EcoR I識別序列(5'-GACTTC-3')突變?yōu)橥暾腅coR I識別序列(5'-GAATTC-3'),從而有利于CAV基因組的體外自身環(huán)化。將體外自身環(huán)化的重組體轉染MDCC-MSB1細胞,獲得感染

3、性克隆。為下一步研究其對病毒致病性的影響,研制弱毒性或無毒性的CAV疫苗株探索一條新路。
   環(huán)介導等溫擴增(Loop-mediated isothermal amplification,LAMP)技術通過具有鏈置換特性的Bst DNA聚合酶完成靶序列的擴增,僅需恒溫加熱就能擴增DNA,并可以通過核酸染料染色觀察結果,具有簡便、快速的特點。本研究利用雞傳染性貧血病毒Cux-1株基因為靶序列設計了6條引物并建立了LAMP檢測方法

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