番茄葉色黃化突變體差異蛋白研究及分析.pdf

1、番茄(Lycopersicon esculentum Mill)是全世界范圍內(nèi)的重要蔬菜作物，其經(jīng)濟(jì)價(jià)值與應(yīng)用價(jià)值也受到越來(lái)越廣泛的重視。葉色變異是植物界的生命現(xiàn)象之一，在番茄中發(fā)現(xiàn)了許多葉色突變體，如含有nv基因的突變體、含有dg基因的突變體等，對(duì)這些突變體的研究不但揭示了葉綠素合成及降解過(guò)程和葉綠體遺傳、發(fā)育理論。同時(shí)為葉色突變體的應(yīng)用打下了基礎(chǔ)。東北農(nóng)業(yè)大學(xué)番茄研究所在中蔬四號(hào)的群體中發(fā)現(xiàn)了田間自然葉色突變體，并定名為06883，

2、這個(gè)突變體與已知的葉色突變體不同，對(duì)這個(gè)突變體進(jìn)行研究除直接可以用于揭示葉綠素合成代謝過(guò)程外，對(duì)于闡明光合膜與光合功能的系統(tǒng)建成，葉綠體發(fā)育相關(guān)基因的表達(dá)與調(diào)控，以及環(huán)境信號(hào)對(duì)葉綠體和其它器官的形態(tài)建成等問(wèn)題將起到積極作用。
　　 番茄葉色突變體06883是在番茄自交系中蔬四號(hào)(06884)中發(fā)現(xiàn)的自然葉色突變體，本試驗(yàn)首先建立了適合番茄黃化突變體06883葉片蛋白質(zhì)組學(xué)分析的提取方法和雙向電泳體系，利用建立好的體系對(duì)06883

3、和06884的葉片進(jìn)行差異蛋白質(zhì)組學(xué)分析，旨在研究06883的葉片總蛋白的變化規(guī)律，為突變體番茄葉色突變機(jī)理提供更多的理論依據(jù)。試驗(yàn)結(jié)果如下：
　　 1.對(duì)番茄黃化突變體06883蛋白質(zhì)提取方法進(jìn)行篩選，以06883新鮮葉片為材料，分別采用了TCA丙酮法、Tris-base丙酮法、Tris-Hcl法提取葉片蛋白，在蛋白提取產(chǎn)量，單向和雙向電泳圖譜等方面比較了這三種方法的提取效果，結(jié)果表明：優(yōu)化的TCA丙酮法是葉片蛋白提取的最佳方

4、法；
　　 2.優(yōu)化番茄黃化突變體06883進(jìn)行雙向電泳體系，從IPG膠條PH范圍、上樣量、染色方式等幾方面進(jìn)行選擇，結(jié)果表明：24 cm PH4～7 IPG膠條最適于番茄黃化突變體06883葉片蛋白分離；1200 ug為最佳上樣量；R350是分離膠的最佳染色方式。
　　 3.通過(guò)定性和定量分析發(fā)現(xiàn)共有24個(gè)蛋白質(zhì)點(diǎn)的表達(dá)發(fā)生顯著的變化，其中只在番茄黃化突變體06883中表達(dá)的蛋白點(diǎn)有2個(gè)，只在中蔬4號(hào)06884中表達(dá)的

5、蛋白點(diǎn)有3個(gè)。與對(duì)照組中蔬4號(hào)06884相比，在番茄黃化突變體中表達(dá)量增加的蛋白質(zhì)點(diǎn)12個(gè)，表達(dá)量減少的蛋白質(zhì)點(diǎn)12個(gè)(P<0.05)。將24個(gè)差異表達(dá)的蛋白點(diǎn)進(jìn)行質(zhì)譜分析，其中23個(gè)蛋白點(diǎn)得到了成功的鑒定。通過(guò)GO數(shù)據(jù)庫(kù)(http：//www.geneontology.org/)檢索以及相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道，對(duì)所鑒定的蛋白質(zhì)功能進(jìn)行分類。結(jié)果表明，這些差異表達(dá)的蛋白質(zhì)分別屬于能量相關(guān)蛋白、代謝相關(guān)蛋白、結(jié)合蛋白、信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)蛋白、抗性相關(guān)蛋白等。