番茄葉色黃化突變體差異蛋白研究及分析.pdf

1、番茄(Lycopersicon esculentum Mill)是全世界范圍內(nèi)的重要蔬菜作物，其經(jīng)濟價值與應用價值也受到越來越廣泛的重視。葉色變異是植物界的生命現(xiàn)象之一，在番茄中發(fā)現(xiàn)了許多葉色突變體，如含有nv基因的突變體、含有dg基因的突變體等，對這些突變體的研究不但揭示了葉綠素合成及降解過程和葉綠體遺傳、發(fā)育理論。同時為葉色突變體的應用打下了基礎。東北農(nóng)業(yè)大學番茄研究所在中蔬四號的群體中發(fā)現(xiàn)了田間自然葉色突變體，并定名為06883，

2、這個突變體與已知的葉色突變體不同，對這個突變體進行研究除直接可以用于揭示葉綠素合成代謝過程外，對于闡明光合膜與光合功能的系統(tǒng)建成，葉綠體發(fā)育相關基因的表達與調(diào)控，以及環(huán)境信號對葉綠體和其它器官的形態(tài)建成等問題將起到積極作用。
　　 番茄葉色突變體06883是在番茄自交系中蔬四號(06884)中發(fā)現(xiàn)的自然葉色突變體，本試驗首先建立了適合番茄黃化突變體06883葉片蛋白質(zhì)組學分析的提取方法和雙向電泳體系，利用建立好的體系對06883

3、和06884的葉片進行差異蛋白質(zhì)組學分析，旨在研究06883的葉片總蛋白的變化規(guī)律，為突變體番茄葉色突變機理提供更多的理論依據(jù)。試驗結(jié)果如下：
　　 1.對番茄黃化突變體06883蛋白質(zhì)提取方法進行篩選，以06883新鮮葉片為材料，分別采用了TCA丙酮法、Tris-base丙酮法、Tris-Hcl法提取葉片蛋白，在蛋白提取產(chǎn)量，單向和雙向電泳圖譜等方面比較了這三種方法的提取效果，結(jié)果表明：優(yōu)化的TCA丙酮法是葉片蛋白提取的最佳方

4、法；
　　 2.優(yōu)化番茄黃化突變體06883進行雙向電泳體系，從IPG膠條PH范圍、上樣量、染色方式等幾方面進行選擇，結(jié)果表明：24 cm PH4～7 IPG膠條最適于番茄黃化突變體06883葉片蛋白分離；1200 ug為最佳上樣量；R350是分離膠的最佳染色方式。
　　 3.通過定性和定量分析發(fā)現(xiàn)共有24個蛋白質(zhì)點的表達發(fā)生顯著的變化，其中只在番茄黃化突變體06883中表達的蛋白點有2個，只在中蔬4號06884中表達的

5、蛋白點有3個。與對照組中蔬4號06884相比，在番茄黃化突變體中表達量增加的蛋白質(zhì)點12個，表達量減少的蛋白質(zhì)點12個(P<0.05)。將24個差異表達的蛋白點進行質(zhì)譜分析，其中23個蛋白點得到了成功的鑒定。通過GO數(shù)據(jù)庫(http：//www.geneontology.org/)檢索以及相關文獻報道，對所鑒定的蛋白質(zhì)功能進行分類。結(jié)果表明，這些差異表達的蛋白質(zhì)分別屬于能量相關蛋白、代謝相關蛋白、結(jié)合蛋白、信號轉(zhuǎn)導蛋白、抗性相關蛋白等。