雞胚性分化早期性別差異表達miRNAs的鑒定及其特性分析.pdf

1、miRNA是近年來新發(fā)現(xiàn)的一類在轉錄后水平下調(diào)基因表達的小分子非編碼RNA家族。研究發(fā)現(xiàn)，miRNA在動物發(fā)育過程中發(fā)揮著重要作用，但它在雞胚性腺分化中的調(diào)控作用還未確定。為研究miRNA在雞胚早期性分化過程中的表達，探討miRNA在性腺早期發(fā)育中的作用，本研究以前期芯片篩選出的差異表達miRNAs為研究對象，對其中新的miRNAs進行生物信息學分析，并分析了候選miRNAs在雌、雄雞胚早期性腺中的時空表達模式。本研究所取得的結果如下：

2、
　　 1.利用雞基因組信息對新miRNAs進行定位，發(fā)現(xiàn)miR-363和363*、miR-551b和miR-612分別位于雞染色體4(-)、9(-)和Z(-)上，同時通過克隆獲得了miR-363*在雞基因組上的未知側翼序列。前體的二級結構折疊結果表明，預測的雞新miRNAs均具有莖環(huán)狀前體結構，成熟序列基本位于相應的莖部，且折疊最低自由能均≤-25kcal/mol。miR-363(363*)和miR-551b在人、大鼠、小鼠和

3、雞4個物種中的同源性分析結果表明，前體序列的相似性均在80％以上，且成熟序列中僅有個別堿基的差異。
　　 2.利用RNA加尾及引物延伸和莖環(huán)狀引物的半定量RT-PCR方法分析了13個miRNAs在E3.5～6.5 d雌、雄雞胚性腺中的時間表達譜，并對它們在同一時期不同性別中以及同一性別不同時期中的差異性進行了顯著性分析。結果表明，從總體趨勢看，所檢測miRNAs中有5個呈雌性高表達和4個呈雄性高表達，其余4個為不規(guī)則表達；miR

4、-363、miR-200b、miR-1810、miR-1599、miR-551b和miR-196在所檢某些時期兩性間的差異表達達到顯著或極顯著水平；miR-363、miR-1456、 miR-196、miR-363*、miR-612、miR-1599、miR-126和miR-1810在同一性別某些時期間的表達存在顯著或極顯著差異。
　　 3.利用WISH技術對miR-363和miR-1810進行空間表達模式分析，結果表明，miR

5、-363主要在E4.5d雞胚的四肢、外胚層、脊索以及腦等部位表達，在E6.5d性腺部位的表達明顯高于腎臟，且在雌性性腺中的表達高于雄性；miR-1810主要在E4.5d雞胚的腦和四肢表達，在E6.5及E8.5d性腺中表達高于腎臟，且雄性性腺中的表達高于雌性。
　　 結合本研究結果及其它物種中相應miRNA的研究，篩選了5個(miR-363、miR-551b、miR-1810、miR-1599和miR-200b)可能參與早期雞胚性