蘋(píng)果輪紋病菌對(duì)戊唑醇的敏感性與分子檢測(cè).pdf

1、蘋(píng)果輪紋病是蘋(píng)果生產(chǎn)上的一種重要病害，主要危害蘋(píng)果枝干和果實(shí)，因其防治難、危害重，是目前我國(guó)蘋(píng)果生產(chǎn)的重要制約因素之一。
　　 為了明確蘋(píng)果輪紋病菌對(duì)三唑類殺菌劑戊唑醇的敏感性現(xiàn)狀，從有代表性的蘋(píng)果種植區(qū)采集、分離了98個(gè)蘋(píng)果輪紋病菌（Botryosphaeria berengerianaf.sp.Piricola）菌株，采用菌絲生長(zhǎng)速率法測(cè)定其對(duì)戊唑醇的敏感性。結(jié)果表明，戊唑醇對(duì)98個(gè)菌株的EC50值在0.0054-3.325

2、3 mg/L，平均值為0.4256±0.1090mg/L。其中，菌株XX2B（EC50為3.3253 mg/L）對(duì)戊唑醇的敏感性較低，QF2（EC50為0.0054 mg/L）對(duì)其最敏感，其毒力倍數(shù)是XX2B的620.38倍。山東省、陜西省、河南省和遼寧省的蘋(píng)果輪紋菌對(duì)戊唑醇的EC50平均值分別為0.5715±0.4612 mg/L、0.5348±0.6935 mg/L、0.4020±0.1006 mg/L和0.2667±0.2083m

3、g/L，表明遼寧省的蘋(píng)果輪紋菌對(duì)戊唑醇的敏感程度最高，山東省的敏感性最低。但不同地理來(lái)源的蘋(píng)果輪紋病菌對(duì)戊唑醇的敏感性差異不明顯。
　　 應(yīng)用人工接種的方法，對(duì)不同地理區(qū)域、不同敏感性的33個(gè)B.berengrianaf.sp.piricola在蘋(píng)果枝干上接種后的致病力分化進(jìn)行了研究。結(jié)果顯示：蘋(píng)果輪紋病菌菌株存在致病力分化現(xiàn)象，來(lái)自蘋(píng)果主產(chǎn)區(qū)33株蘋(píng)果輪紋病菌接種在蘋(píng)果枝條上的病情指數(shù)平均值為25.94+4.82，不同的菌株接

4、種在蘋(píng)果枝條上的病情指數(shù)差異顯著。
　　 采用3種不同的提取方法（尿素提取法、氯化芐提取法以及SDS-CTAB提取法）對(duì)蘋(píng)果輪紋病菌的基因組DNA進(jìn)行提取和比較。結(jié)果表明，三種方法均能提取到蘋(píng)果輪紋病菌的基因組DNA。其中，SDS-CTAB法效率最高，提取的DNA質(zhì)量最好，但是耗時(shí)較長(zhǎng)；尿素提取法操作簡(jiǎn)單快速，但是提取的DNA質(zhì)量較低；氯化芐提取法獲得的DNA純度最低，蛋白質(zhì)污染嚴(yán)重。三種方法所提取的DNA經(jīng)ITS試驗(yàn)檢測(cè)與電泳

5、結(jié)果分析表明：DNA擴(kuò)增效果良好，可滿足該真菌rDNA ITS分析的要求。
　　 利用引物ITS1/ITS4和Bt2a/Bt2b克隆了蘋(píng)果輪紋菌ITS序列和β-tubulin基因片段并測(cè)序。截取蘋(píng)果輪紋菌rDNA的ITS和β-tubulin基因序列，與其它輪紋菌進(jìn)行核苷酸序列比對(duì)，發(fā)現(xiàn)敏感性較低的三株蘋(píng)果輪紋菌（QF8B，PL7，XX2B）與Botryosphaeria rhodina的ITS和β-tubulin序列相似性高達(dá)9