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1、蘋(píng)果輪紋病是蘋(píng)果生產(chǎn)上的一種重要病害,主要危害蘋(píng)果枝干和果實(shí),因其防治難、危害重,是目前我國(guó)蘋(píng)果生產(chǎn)的重要制約因素之一。
為了明確蘋(píng)果輪紋病菌對(duì)三唑類殺菌劑戊唑醇的敏感性現(xiàn)狀,從有代表性的蘋(píng)果種植區(qū)采集、分離了98個(gè)蘋(píng)果輪紋病菌(Botryosphaeria berengerianaf.sp.Piricola)菌株,采用菌絲生長(zhǎng)速率法測(cè)定其對(duì)戊唑醇的敏感性。結(jié)果表明,戊唑醇對(duì)98個(gè)菌株的EC50值在0.0054-3.325
2、3 mg/L,平均值為0.4256±0.1090mg/L。其中,菌株XX2B(EC50為3.3253 mg/L)對(duì)戊唑醇的敏感性較低,QF2(EC50為0.0054 mg/L)對(duì)其最敏感,其毒力倍數(shù)是XX2B的620.38倍。山東省、陜西省、河南省和遼寧省的蘋(píng)果輪紋菌對(duì)戊唑醇的EC50平均值分別為0.5715±0.4612 mg/L、0.5348±0.6935 mg/L、0.4020±0.1006 mg/L和0.2667±0.2083m
3、g/L,表明遼寧省的蘋(píng)果輪紋菌對(duì)戊唑醇的敏感程度最高,山東省的敏感性最低。但不同地理來(lái)源的蘋(píng)果輪紋病菌對(duì)戊唑醇的敏感性差異不明顯。
應(yīng)用人工接種的方法,對(duì)不同地理區(qū)域、不同敏感性的33個(gè)B.berengrianaf.sp.piricola在蘋(píng)果枝干上接種后的致病力分化進(jìn)行了研究。結(jié)果顯示:蘋(píng)果輪紋病菌菌株存在致病力分化現(xiàn)象,來(lái)自蘋(píng)果主產(chǎn)區(qū)33株蘋(píng)果輪紋病菌接種在蘋(píng)果枝條上的病情指數(shù)平均值為25.94+4.82,不同的菌株接
4、種在蘋(píng)果枝條上的病情指數(shù)差異顯著。
采用3種不同的提取方法(尿素提取法、氯化芐提取法以及SDS-CTAB提取法)對(duì)蘋(píng)果輪紋病菌的基因組DNA進(jìn)行提取和比較。結(jié)果表明,三種方法均能提取到蘋(píng)果輪紋病菌的基因組DNA。其中,SDS-CTAB法效率最高,提取的DNA質(zhì)量最好,但是耗時(shí)較長(zhǎng);尿素提取法操作簡(jiǎn)單快速,但是提取的DNA質(zhì)量較低;氯化芐提取法獲得的DNA純度最低,蛋白質(zhì)污染嚴(yán)重。三種方法所提取的DNA經(jīng)ITS試驗(yàn)檢測(cè)與電泳
5、結(jié)果分析表明:DNA擴(kuò)增效果良好,可滿足該真菌rDNA ITS分析的要求。
利用引物ITS1/ITS4和Bt2a/Bt2b克隆了蘋(píng)果輪紋菌ITS序列和β-tubulin基因片段并測(cè)序。截取蘋(píng)果輪紋菌rDNA的ITS和β-tubulin基因序列,與其它輪紋菌進(jìn)行核苷酸序列比對(duì),發(fā)現(xiàn)敏感性較低的三株蘋(píng)果輪紋菌(QF8B,PL7,XX2B)與Botryosphaeria rhodina的ITS和β-tubulin序列相似性高達(dá)9
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