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文檔簡(jiǎn)介
1、新城疫病毒(Newcastlediseasevirus,NDV)嚴(yán)重危害了各國(guó)養(yǎng)禽業(yè)的發(fā)展。目前國(guó)內(nèi)外均采用疫苗免疫接種進(jìn)行預(yù)防,尚無(wú)有效的治療藥物,而中藥多糖在治療新城疫疾病方面顯示出巨大的潛力。
本試驗(yàn)在初步篩選出的具有抗新城疫病毒活性的中藥多糖的基礎(chǔ)上,以淫羊藿多糖(Epimediumpolysaccharide,EPS)為研究對(duì)象,開(kāi)展了如下研究?jī)?nèi)容:
在單因素考察的基礎(chǔ)上,用正交實(shí)驗(yàn)優(yōu)選EPS超聲提
2、取法和超聲協(xié)同酶提取法的提取條件,超聲提取法最優(yōu)提取條件為:時(shí)間為50min,物料比為1:20,溫度為60℃;在該條件下采用苯酚-硫酸法測(cè)得EPS的提取率為24.12%,含量為0.56%;超聲協(xié)同酶法所最優(yōu)提取條件為:酶含量0.210g,時(shí)間為30min,pH值為9,溫度為70℃,EPS提取率為45.23%,含量為1.06%。發(fā)現(xiàn)超聲協(xié)同酶提取法優(yōu)于超聲波提取法。比較了Sevag法、反復(fù)凍融法、反復(fù)凍融結(jié)合Sevag法三種除蛋白的效果,
3、選出最佳的方法是反復(fù)凍融結(jié)合Sevag法。用DEAEA-52分離EPS可以得到兩個(gè)洗脫峰。
在對(duì)氯磺酸-吡啶體積比、反應(yīng)時(shí)間、反應(yīng)溫度單因素考察的基礎(chǔ)上,以SO42-含量和硫酸基取代度(DS)為指標(biāo),正交實(shí)驗(yàn)優(yōu)選EPS的氯磺酸-吡啶法硫酸化修飾條件,所得最適硫酸化條件為:體積比為1:6,反應(yīng)時(shí)間為2.5h,反應(yīng)溫度為60℃;在該條件下所得多糖的SO42-含量為13.57%,DS為1.22。經(jīng)紫外光譜分析,在190~220n
4、m處有一強(qiáng)吸收峰,為多糖類(lèi)物質(zhì)吸收峰,在250-275nm之間有明顯的-SO3的特征吸收峰。紅外光譜分析結(jié)果表明硫酸酯化是成功的,EPS和硫酸酯化淫羊藿多糖(sulfatedEPS,sEPS)均具有多糖母體的特征吸收峰,sEPS還有1259cm-1左右的S=O特征吸收峰和787cm-1左右的C-O-S特征吸收峰。
體外細(xì)胞培養(yǎng)MTT法結(jié)果表明硫酸酯化后EPS的抗病毒活性有明顯的提高,尤其是先加多糖后加病毒和病毒多糖同時(shí)加入
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