喹噁啉類在大鼠和豬肝微粒體中脫氧速率與肝細胞中毒性的研究.pdf

1、喹噁啉類是化學合成的具有抗菌、促生長作用的動物專用藥，包括卡巴氧、喹乙醇、喹賽多、喹烯酮和乙酰甲喹等。因毒副作用，卡巴氧和喹乙醇已被禁止或限制使用。我國相繼批準了乙酰甲喹和喹烯酮的使用，并正在開發(fā)安全的喹賽多等同類產品。喹噁啉-N-一氧化物的毒性比喹噁啉-N1,N4-二氧化物低，完全脫氧的喹嗯啉無毒性，因此喹噁啉-N1,N4-二氧化物脫氧速率越快，毒性喪失越快。喹嗯啉類母環(huán)結構完全相同，都會發(fā)生相同的N→O基團還原反應，生成脫氧代謝物。

2、不同化合物由于側鏈不一樣，會對脫氧速率產生影響。脫氧快慢存在明顯差異，這種差異是否與其脫氧速率快慢相關尚無直接的研究證據。此外，研究表明，含有N-N-二氧基團的化合物在脫氧的同時會產生超氧陰離子和OH自由基，導致DNA損傷、線粒體損傷、細胞凋亡等氧化應激毒性反應。喹噁啉類是否會產生類似的毒性反應尚值得探討。因此為了揭示喹噁啉類脫氧速率與毒性的關系，進一步研究喹噁啉類的脫氧速率與氧化應激毒性關系是非常必要的。
　　 本課題通過體外

3、研究法探研了喹噁啉類藥物在肝微粒體中的脫氧速率和在原代肝細胞中的氧化應激毒性，在此基礎上，結合實驗室前期研究結果深入分析了脫氧速率與主要毒性指標之間的相關性，為闡明喹嗯啉類的毒性機理和毒性差異提供科學依據。
　　 采用差速離心法制備大鼠和豬肝微粒體，喹噁啉類與微粒體在低氧和有氧條件下37℃孵育，用LC/MS-ITTOF鑒定脫氧產物，HPLC法進行相對定量，比較了喹噁啉類在肝微粒體孵育體系中脫氧速率，并考察了NADPH和NADH兩

4、種輔酶對還原反應的影響。結果顯示，在輔酶NADPH和低氧條件下：喹賽多、喹乙醇、乙酰甲喹、卡巴氧和喹烯酮在大鼠肝微粒體中的脫一氧生成速率分別為：1.74、1.94、1.99、5.48和20.81min，脫二氧生成速率分別為：35.36、43.86、231、67.94和630min；在豬肝微粒體中脫一氧生成速率分別為1.93、2.16、2.36、6.07和27.02min,脫二氧生成速率分別為：36.28、44.14、223.55、72.

5、19和693min。在輔酶NADH和低氧條件下，喹賽多、喹乙醇、乙酰甲喹、卡巴氧、喹烯酮在大鼠肝微粒體中的脫一氧生成速率分別為5.38、8.51、9.16、27.61和51.33min；豬肝微粒體中脫一氧生成速率分別為6.35、13.54、20.69、29.24和113.61min。在輔酶NADH和低氧條件作用下，大鼠肝微粒體中脫二氧產物很少，豬中未檢測到脫二氧產物；在有氧條件下通過HPLC也檢測不到脫二氧產物。此類藥物脫氧具有很強的低

6、氧偏好，低氧條件下脫氧產物濃度比有氧脫氧產物濃度要高6～10倍左右。綜上所述，五種喹噁啉類藥物脫一氧生成速率為喹賽多＞喹乙醇＞乙酰甲喹＞卡巴氧＞喹烯酮，脫二氧生成速率為喹賽多＞喹乙醇＞卡巴氧＞乙酰甲喹＞喹烯酮。
　　 采用組織消化法制備原代肝細胞，分別與五種喹噁啉類藥物在5％CO2，37℃孵育4h后，染毒劑量為5μmol/L,25μmol/L，50μmol/L，同時設置空白對照組和溶劑對照組。通過測定細胞上清液中乳酸脫氫酶(LD

7、H)和細胞胞內谷胱甘肽(GSH)、超氧化物歧化酶(SOD)含量變化來反應氧化應激毒性。結果表明，與空白對照組相比，五種藥物均可以導致LDH上升和GSH下降，SOD先上升后下降，具有劑量依賴性，隨劑量增大毒性增大。喹烯酮5μmol/L染毒組導致SOD顯著上升(p＜0.05)。乙酰甲喹和喹烯酮染毒濃度大于25μmol/L時導致SOD和GSH下降極顯著(p＜0.01)、LDH上升極顯著(p＜0.01)，喹烯酮變化明顯。卡巴氧染毒濃度大于25μ

8、mol/L時導致SOD和GSH顯著下降(p＜0.05),LDH顯著上升(p＜0.05)。喹乙醇25μmol/L時導致LDH顯著上升(p＜0.05)，50μmol/L時LDH上升極顯著(p＜0.01)。喹賽多在濃度50μmol/L時，SOD、LDH和GSH變化才表現出顯著差異(p＜o.05)。由此看出喹烯酮毒性和乙酰甲喹毒性較大，其次是卡巴氧和喹乙醇，喹賽多毒性最小。
　　 采用兩個變量相關分析法，分析了不同條件下脫一氧和脫二氧的

9、生成速率與LD50、NOAEL、SOD、GSH和LDH之間的相關性。結果表明，喹賽多、喹乙醇、乙酰甲喹、卡巴氧和喹烯酮脫一氧和脫二氧生成速率與LD50、NOAEL、GSH和SOD之間呈負相關，與LDH呈正相關，說明脫氧越快，毒性越?。幻撘谎跎伤俾逝cLD50呈實相關(r＜0.5)，與體外氧化應激毒性呈顯著相關(r≈0.5)，脫二氧生成速率與LD50呈顯著實相關(r＞0.5)，與體外氧化應激毒性呈高度相關(r＞0.8)?？梢钥闯觯摱跎?/p>