影響綿羊卵母細(xì)胞玻璃化冷凍效果的因素研究.pdf

1、卵母細(xì)胞玻璃化冷凍保存對(duì)于珍稀和瀕危種質(zhì)資源保存、“卵子庫(kù)”的建立、胚胎生物技術(shù)的發(fā)展具有重要意義。本實(shí)驗(yàn)以綿羊卵母細(xì)胞為研究模型,通過(guò)比較卵母細(xì)胞不同發(fā)育階段、卵丘細(xì)胞有無(wú)及冷凍前用紫杉醇及細(xì)胞松弛素B預(yù)處理對(duì)綿羊卵母細(xì)胞玻璃化冷凍保存效果的影響,并對(duì)解凍后卵母細(xì)胞進(jìn)行體外受精、孤雌激活,結(jié)果表明:(1)體外成熟24h綿羊卵母細(xì)胞(MⅡ stage)與未成熟卵母細(xì)胞(GV stage)相比,玻璃化冷凍-解凍后FAD染色存活率為(70.

2、63％vs.58.51％)；體外受精卵裂率(38.42％vs.22.68％),囊胚率(5.89％vs.O)具有顯著性差異(P<0.05)。表明:成熟的綿羊卵母細(xì)胞更適宜冷凍保存。(2)卵丘細(xì)胞的有無(wú)對(duì)玻璃化冷凍MⅡ期卵母細(xì)胞解凍后存活率、卵裂率、囊胚率均無(wú)顯著性差異(P>0.05)。(3)采用濃度為0.5μmol／L紫杉醇預(yù)處理綿羊卵母細(xì)胞冷凍保存效果最佳,解凍后卵母細(xì)胞的存活率(82.38％)與其他三個(gè)實(shí)驗(yàn)組相比有顯著差異性(P<0.

3、05)；體外受精卵裂率(51.17％)和桑囊胚率(20.30％)亦顯著高于其他實(shí)驗(yàn)組(P<0.05),但低于對(duì)照組(69.42％,34.77％)(P<0.05)；0.5μmol／L紫杉醇處理組孤雌激活卵裂率(53.61％)和桑囊胚率(22.64％),顯著高于其他實(shí)驗(yàn)組,但于對(duì)照組(73.40％,33.79)(P<0.05)。(4)7.5μg／mL的細(xì)胞松弛素B預(yù)處理綿羊卵母細(xì)胞冷凍。解凍后的存活率(64.50％vs.68.87％)無(wú)顯著