腦脊液與血清中h2s、no水平對患兒不同病原顱內感染的鑒別意義

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文檔簡介

1、　　分類號　　UDC　　密級　　編號　　碩士學位論文</p

2、>　　腦脊液與血清中 H2S、NO水平對患兒　　不同病原顱內感染的鑒別意義　　研究生姓名　　：胡擎鵬　　指導教師姓名、職稱：湯永紅教授

3、;　　學科、專業(yè) 名稱：神經病學　　研　　究　　方　　向<

4、p>　?。?顱內感染　　2014 年 12 月　　萬方數據　　南華大學學位論文原創(chuàng)性聲明　　本人聲明，所呈交的學位論文是本人在導師指導下進行的研究工作及取得的研究&l

5、t;p>　　成果。盡我所知，除了論文中特別加以標注和致謝的地方外，論文中不包含其他人已　　經發(fā)表或撰寫過的研究成果，也不包含為獲得南華大學或其他單位的學位或證書而使　　用過的材料。與我共同工作的同志對本研究所作的貢獻均已在論文中作了明確的說　　明。本人完全意識到本聲明的法律結果由本人承擔。

6、;　　作者簽名：　　年　　月　　日　　南華大學學位論文版權使用授權書<

7、;p>　　本學位論文是本人在南華大學攻讀碩士學位期間在導師指導下完成的學位論　　文。本論文的研究成果歸南華大學所有，本論文的研究內容不得以其它單位的名義發(fā)　　表。本人同意南華大學有關保留、使用學位論文的規(guī)定，即：學校有權保留學位論文，　　允許學位論文被查閱和借閱；學?？梢怨紝W位論文的全部或部分內容，可以采

8、用復　　印、縮印或其它手段保留學位論文；學校可根據國家或湖南省有關部門規(guī)定送交學位　　論文。同意學校將論文加入《中國優(yōu)秀博碩士學位論文全文數據庫》，并按《中國優(yōu)　　秀博碩士學位論文全文數據庫出版章程》規(guī)定享受相關權益。同意授權中國科學信息　　技術研究所將本學位論文收錄到《

9、中國學位論文全文數據庫》，并通過網絡向社會公　　眾提供信息服務。對于涉密的學位論文，解密后適用該授權。　　作者簽名：　　導師簽名：　　年

10、　　月　　日　　年　　月　　日<

11、p>　　萬方數據　　目　　錄　　主要英文縮略索引…………………………………………………… 1　　中文摘要………………………………………………………………

12、 2　　英文摘要…………………………………………………………… 4　　論文正文…………………………………………………………… 7　　前言……………………………………………………………… 7　　對象與方法………………………………………………………… 9

13、　　結果……………………………………………………………… 16　　討論……………………………………………………………… 22　　結論……………………………………………………………… 25　　參考文獻………………………………………………………… 26

14、綜述……………………………………………………………… 28　　綜述參考文獻…………………………………………………… 34　　攻讀碩士學位期間發(fā)表的論文 ……………………………… 35　　致謝……………………………………………………………………36　　萬方

15、數據　　主要英文縮略語索引　　縮寫　　CNSI　　H2S&

16、lt;b>　　NO　　英文全稱　　central nervous system infection　　hydrogensulfide　　nitric oxide<

17、;b>　　中文名稱　　中樞神經系統(tǒng)感染　　硫化氫　　一氧化氮　　ELISA

18、　　enzyme-linked immunosorbentassay 酶聯(lián)免疫反應　　CSF　　PM　　TM　　VE&

19、lt;/b>　　FeC13　　CBS　　CSE　　3MST<b&g

20、t;　　NOS　　cerebrospinal fluid　　Purulent meningitis　　Tuberculous meningitis　　Viral encephalitis　　trichlorid

21、e ferric　　cystathionine-β-synthase　　cystathionine-γ-lyase　　3-mercaptopyruvate transsulphurase　　nitric oxide synthase

22、;　　腦脊液　　化膿性腦膜炎　　結核性腦膜炎　　病毒性腦炎　　三氯化鐵</p

23、>　　胱硫醚-β-合酶　　胱硫醚-γ-裂解酶　　3-巰基丙酮酸轉硫酶　　一氧化氮合酶　　BBB

24、;　　brain-blood　　barrier,　　血腦屏障　　1　　萬方數據

25、　　腦脊液與血清中 H2S、NO 水平對患兒不同病原　　顱內感染的鑒別意義　　摘要　　目的：　　在小兒顱內感染中，通

26、過檢測血清及腦脊液中 H2S、NO 的含量，探討 H2S、NO 在　　三種不同類型小兒顱內感染中的改變，探索快速有效的檢測輔助診斷手段，以鑒別不　　同病原顱內感染，指導臨床的診斷及治療，最大程度改善預后和減少腦損傷。　　方法：　　采用

27、雙抗體夾心 ELISA 法和 ELISA 酶聯(lián)免疫法對 68 例中樞神經系統(tǒng)感染(CNSI)　　患兒的血清和腦脊液中的 H2S、NO 水平分別進行檢測,其中病毒性腦炎 30 例，結核性　　腦膜炎 16 例，化膿性腦膜炎 22 例和非顱內感染對照組 20 例，然后將顱內感染患兒　　血清和腦脊液中 NO 和 H2S

28、含量與非顱內感染患兒組之間進行分析比較，以及不同類　　型顱內感染患兒血清和腦脊液中 NO 和 H2S 的變化水平比較，探討不同顱內感染患兒　　血清和腦脊液中 NO 和 H2S 含量的變化及 NO 和 H2S 在顱內感染發(fā)病中的相互作用，尋　　找快速檢測輔助診斷手段，以鑒別不同病原體顱內感染，實驗數據數據處理采用&

29、lt;/p>　　SPSS20.0 統(tǒng)計軟件，P<0.05 為有統(tǒng)計學意義。　　結果：　　1．顱內感染組患兒腦脊液中 H2S 水平表現(xiàn)為化膿性腦膜炎組最高、結核性腦膜　　炎組次之、病毒性腦炎組最低,數據如下：①化膿性腦膜炎組 46.4±

30、;7.4μmol/L,與　　對照組比較，P=0.001;②結核性腦膜炎組 33.6±5.7μmol/L，與對照組比較，P=0.003;　?、鄄《拘阅X炎組 13.3±2.2μmol/L，與對照組比較，P＞0.05;，化腦組及結腦組明　　顯高于對照組 10.8±2.4μmol/L；病腦組

31、無明顯升高；顱內感染組組間差異具有顯　　著性。　　2　　萬方數據　　2. 顱內感染組患兒腦脊液中 NO 水平表現(xiàn)為結核性腦膜炎組最高、化膿性腦膜炎</p

32、>　　組次之、病毒性腦炎組最低,數據如下：①結核性腦膜炎組 105.3±9.7μmol/L，與　　對照組比較，P=0.001;②化膿性腦膜炎 97.3±10.7μmol/L 與對照組比較，P=0.002;　　③病毒性腦炎組 86.2±5.8μmol/L，與對照組比較，P=0.005；均顯著高于對照

33、組 35.9　　±5.4μmol/L，且顱內感染組組間差異具有顯著性；　　3. 顱內感染組患兒血清中 H2S 水平數據如下：①化膿性腦膜炎組 89.4±6.5μ　　mol/L，與對照組比較，P=0.001;②結核性腦膜炎 83.3±6.8μmol/L,與對照組比較，

34、;　　P=0.005;③病毒性腦炎組 34.5±5.3μmol/L, 與對照組比較，P>0.05;化腦組及結腦　　組明顯高于對照組 31.0±5.7μmol/L；結核性腦膜炎及化膿性腦膜炎組明顯高于病　　腦組，病毒性腦炎組無明顯升高。　　4. 顱內感染組患兒血清中

35、NO 水平數據如下：①結核性腦膜炎組 76.2±7.7μ　　mol/L,與對照組比較，P=0.001;②化膿性腦膜炎組 63.3±5.1μmol/L,與對照組比　　較，P=0.002③病毒性腦炎組 45.7±5.3μmol/L，明顯高于對照組 21.8±5.2μmol/L，

36、　　P=0.005；組組間差異具有顯著性。　　結論：　　1、顱內感染血清和腦脊液中 H2S、NO 水平均增高，提示內源性 H2S、NO 可能參　　與了顱內感染的發(fā)生與發(fā)展過程；　　2、在結核性腦膜炎、化膿性腦膜炎和病毒性腦炎中，腦脊液

37、和血清中的H2S、NO　　水平有顯著差異，提示其檢測對不同病原顱內感染的診斷和鑒別診斷有重要價值。　　關鍵詞：硫化氫；一氧化氮;　　腦脊液；血清；顱內感染; 兒童；　　3

38、萬方數據　　Clinical Significance of the Changes of H2S、NO in Serum and　　Cerebrospinal Fluid in Children with different types of　　Intracranial Infection&

39、lt;/p>　　Abstract　　Objective：　　In children with intracranial infection, through inspecting the content of H2S and NO　　in seru

40、m and cerebrospinal fluid, probe into the content change of H2S and NO in the three　　different types of intracranial infection in order to detect the diagnostic method of fast and

41、;　　effective to identify the different pathogens encephalitis, guide the clinical diagnosis and　　treatment，improve the prognosis and reduce brain damage the greatest degree.<b

42、>　　Methods:　　Sixty-eight children suffered from CNSI infection whose concentration of H2S、NO in　　serum and cerebrospinal fluid (CSF) were determined with double anti

43、body sandwich　　method and enzyme-linked immunosorbent assay. They included 30 viral encephalitis, 22　　purulent meningitis, 16 tubercular meningitis, and 20 non-CNS disease as the

44、 control　　group， then analyzed and compared the content of NO and H2S in CSF and serum with　　the non intracranial infection and intracranial infection children group , and compar

45、ed the　　levels of NO and H2S in serum and CSF in order to probe the changes and interaction of　　NO and H2S in different types of intracranial infection children and look for the

46、rapid　　detection of diagnostic method to identify the different intracranial infection. Results were　　analyzed by SPSS 20.0. There was statistical difference when P<0.05.</

47、p>　　Results:　　1. With intracranial infection children,the levels of H2S in the cerebrospinal fluid were　　performed and purulent meningitis was th

48、e highest, followed by tuberculous meningitis　　4　　萬方數據　　group, viral encephalitis group was the lowest, the data are as

49、 follows: ①Purulent　　meningitis group was 46.4±7.4μmol/L, P=0.001 compared with the control group;②　　Tuberculous meningitis group was 33.6± 5.7μ mol/L, P=0.003 compared

50、 with the　　control group; ③Viral encephalitis group was 13.3±2.2μmol/L, compared with control　　group, P > 0.05; the tuberculous meningitis and purulent meningitis group w

51、ere obviously　　higher than the control group 10.8±2.4μmol/L; However,there is no obvious difference in　　viral encephalitis group , and the differences in each intracranial i

52、nfection group were also　　significant .　　2. With intracranial infection children,the levels of NO in the cerebrospinal fluid were　　performed and tuberculous

53、meningitis group was the highest, followed by purulent　　meningitis group, viral encephalitis group was the lowest, the data are as follows:　?、賂uberculous meningitis group was 105

54、.3±9.7μmol/L,P=0.001 compared with the control　　group; ②Purulent meningitis group was 97.3±10.7μ mol/L,P=0.002 compared with the　　control group; ③Viral encephalitis gro

55、up was 86.2±5.8μmol/L,P=0.005 compared with the　　control group;significantly higher than that of control group 35.9±5.4μmol/L group, and　　the differences in each group

56、were also significant.　　3. With intracranial infection children,the levels of H2S in serum were performed and　　purulent meningitis was the highest, followed by tuberculous mening

57、itis group, viral　　encephalitis group was the lowest, the data are as follows: ①Purulent meningitis group　　was 89.4±6.5μmol/L,P=0.001 compared with the control group;②Tuberc

58、ulous meningitis　　group was 83.3 ± 6.8μmol/L.P=0.005 compared with the control group; ③ Viral　　encephalitis group was 34.5 ±5.3 μmol/L, P>0.05 compared with the cont

59、rol group, the　　tuberculous meningitis and purulent meningitis group were obviously higher than the viral　　encephalitis group ; and there is no obvious difference in viral enceph

60、alitis group .　　.　　4. With intracranial infection children,the levels of NO in serum were performed and　　tuberculous meningitis group was

61、the highest, followed by purulent meningitis group, viral　　5　　萬方數據　　encephalitis group was the lowest, the data are as

62、follows: ①Tuberculous meningitis　　group was 76.2± 7.7μmol/L, P=0.001 compared with the control group;② Purulent　　meningitis group was 63.3±5.1μmol/L P=0.002 compared wi

63、th the control group;③Viral　　encephalitis group was 45.7 ±5.3μmol/L, P=0.005 compared with the control group;　　significantly higher than that of control group 21.8±5.2μ

64、mol/L , and the differences in each　　group were also significant.　　Conclusions:　　1. With intracranial infection children, the levels of H2S and NO increased

65、in　　cerebrospinal fluid and serum , suggesting that endogenous H2S and NO were involved in　　the pathogenesis and development of intracranial infection.　　2. W

66、ith intracranial infection children, the levels of H2S and NO have a significant　　difference in CSF and serum, indicated the detection of NO and H2S was meaningful in the　　differ

67、ential diagnosis and diagnosis with different types of intracranial infection.　　Keywords: children; intracranial infection; hydrogensulfide；nitric oxide；cerebrospinal　　fluid；seru

68、m；　　6　　萬方數據　　前言　　顱內感染是兒童常見及多發(fā)疾病，病原多為細菌、病毒或結核感染，不同病原體　　引起的顱

69、內感染在早期臨床表現(xiàn)不典型或較相似，且傳統(tǒng)的腦脊液檢查受到多種因素　　的影響：如院外抗生素的反復使用，病程持續(xù)的時間，家屬不愿接受有創(chuàng)檢查，患兒　　不配合，腰椎穿刺術不能完成等，故在早期鑒別患兒不同病原顱內感染有較大的困難，　　本實驗希望通過對顱內感染患兒血清和腦脊液中 NO 和 H2S 含量的檢測，尋找快速有&

70、lt;/p>　　效的輔助診斷手段，以鑒別不同病原體腦炎。　　近年的研究表明，NO 和 H2S 具有多種生理功能，并在多種疾病各系統(tǒng)的病理和生　　理過程中起重要作用.在人類，大鼠及牛的大腦中，已經測量出相對較高水平的 NO　　和 H2S。NO 和 H2S 是機體內重要的氣體信號分子，NO

71、可與細胞內的靶分子結合從而觸　　發(fā)多種信號轉導通路。在中樞神經系統(tǒng)，NO 參與神經遞質的調控，神經的分泌功能，　　調控睡眠，體溫和突觸可塑性調節(jié)；NO 還可能參與神經退行性疾病，腦缺血，腫瘤，　　炎癥，神經元老化、損傷及死亡的發(fā)病機理及精神活動、行為調節(jié)、記憶、發(fā)育等過

72、　　程。在周圍神經系統(tǒng)，NO 參與免疫反應和局部血流量的調節(jié)，介導血管的擴張和平　　滑肌的松弛。此外 NO 還對區(qū)分嗅覺的氣味、調節(jié)視覺的適應性及傳遞痛覺的信號過　　程起一定的調節(jié)作用。但是當 NO 處于高濃度時，將對神經細胞產生神經毒性作用。　　近年研究還發(fā)現(xiàn)，NO 作為逆行性遞質負反饋地調節(jié) NMDA 受體活

73、性，從而具有內源性　　抗癲癇作用。NO 是機體內重要的信使分子、免疫調節(jié)分子和效應分子的觀點，已為　　學術界所廣泛接受。NO 是以氨基酸 L-精氨酸為底物，由 NO 合酶（NOS）蛋白家族催　　化產生的,NO 作為內源性氣體信號分子，可介導炎癥反應及作為缺氧反應中細胞信使

74、　　分子，有報道指出，在顱內感染中 NO 較正常明顯增高，提示 NO 在顱內感染的發(fā)生和　　發(fā)展中發(fā)揮著重要的調節(jié)作用。隨著在各個領域對 NO 的深入研究，運用 NO 的生理作　　用研究開發(fā)了各類 NO 制劑和拮抗劑，其中一部分已從動物實驗走向臨床應用.覃桂芬　　報道表明，在新生兒多種疾病中，既有細胞毒作用，又有

75、免疫調節(jié)作用。　　H2S 的生成依賴于三種酶，胱硫醚 β-合成酶（CBS），3-巰基丙酮酸硫轉移酶　　（3MST ）和胱硫醚 γ-裂解酶（CSE）。1996 年，Abe 等首次通過實驗證明內源性硫　　化氫可能是一種神經活性物質。在中樞神經系統(tǒng)，H2S 作為一種新型的神經調質，可<p&

76、gt;　　加強或抑制神經沖動在神經元的傳遞。H2S 參與認知記憶，神經保護和調節(jié)心肺功能。　　在周圍神經系統(tǒng)， H2S 可能參與心肺和胃腸功能調控以及炎癥和疼痛發(fā)病過程。在利　　7　　萬方數據

77、用大鼠進行的實驗中，證實硫化氫在顱內感染發(fā)病過程中發(fā)揮著重要作用。王俊科等　　報道指出，H2S 對神經功能、腦血管功能及神經內分泌均有調節(jié)作用，在外周組織，　　H2S 對心臟缺血再灌注損傷有保護作用，并通過調節(jié)腎素活性和血管張力起到降壓作　　用。它還可以通過抑制胰島素的釋放，誘導小鼠生長停滯狀態(tài),同時 H2S 與

78、一些遺傳　　性疾病腦損害有關。H2S 為近年來發(fā)現(xiàn)的新型內源性氣體信號分子，雖已證實其在多　　種疾病的生理和病理過程中起重要作用，但其在顱內感染中的變化水平及作用機制國　　內外還很少有報道。　　H2S 和 NO 水平在多種感染性疾病中

79、均有升高，考慮其在各系統(tǒng)的多種疾病中發(fā)揮　　介導抗炎和炎癥的雙重作用，且有報道指出 H2S 和 NO 水平主要與感染的嚴重程度和　　病原的類型有關，與腦脊液檢查相比，抗生素的使用、病程持續(xù)的時間對其檢查結果　　影響相對較小，故本實驗通過對不同病原顱內感染患兒血清和腦脊液中 H2S 和 NO 水

80、　　平的測定，有望在不同病原顱內感染的診斷及鑒別診斷當中開辟一條新途徑。　　本實驗將以顱內感染患兒血清和腦脊液中 NO 和 H2S 含量與非顱內感染患兒對照　　組之間進行分析比較，以及不同類型顱內感染患兒血清和腦脊液中 NO 和 H2S 的變化　　水平比較，探討顱內感染患兒血清和腦脊液中 N

81、O 和 H2S 含量的變化與不同類型顱內　　感染發(fā)病之間的關系及 NO 和 H2S 在顱內感染發(fā)病中的相互作用，探討其臨床變化及　　發(fā)展規(guī)律，尋找快速輔助診斷手段，以鑒別不同病原體腦炎，有助于早期診斷和及時　　治療，最大程度改善愈后和減少腦損傷。　　8&

82、lt;/b>　　萬方數據　　對象和方法　　1.實驗對象與分組　　1.1實驗組納入標準：實驗組患兒為2011年6月至2012年12月入住南華大學附<

83、/p>　　屬第二醫(yī)院兒科，年齡在1月以上并且14歲以下，按照《實用兒科學》第7版中制定的　　標準，通過臨床表現(xiàn)、體格檢查、腦電圖和影像學檢測、腦脊液檢查符合結核性腦膜　　炎、化膿性腦膜炎和病毒性腦炎。　　1.2實驗組排除標準：患兒年齡大于14歲或小于1月應予排除，由于NO和H2S<

84、;/p>　　介導炎癥及抗炎反應，需排除有并發(fā)癥患兒如合并肺炎、腸炎敗血癥等感染性疾病，　　另需排除缺氧缺血性腦病、腦癱、中毒、顱內占位性病變等非感染性顱內疾病。　　1.3實驗組:選取 2011年6月至2012年12月入住南華大學附屬第二醫(yī)院兒科的　　顱內感染性疾病的患兒68例，入院時完

85、善血生化、血常規(guī)、頭顱CT、頭顱MRI、腦　　電圖及腦脊液檢查，診斷標準均符合《實用兒科學》第7版中制定的標準[1]，通過臨　　床表現(xiàn)、腦電圖和影像學檢測和腦脊液檢查以及對治療的反應加以明確。其中病毒性　　腦炎30例，男16例，女14例；年齡5個月～12歲，平均4.8歲；臨床表現(xiàn)為發(fā)熱、不同

86、　　程度意識障礙、抽搐和顱內壓增高，6例有腦膜刺激征表現(xiàn)；其中腦電圖異常有24人，　　腦電圖表現(xiàn)為局限性或彌漫性異常慢波背景活動，少數伴有棘-慢綜合波、棘波；頭　　顱CT異常4例，表現(xiàn)為腦實質密度減低；頭顱MRI異常2例，表現(xiàn)為兩側側腦室旁及　　胼胝體見異常信號，TIWI呈稍高信號，T2WI呈

87、低信號，DWI部分呈高信號。腦脊液　　外觀清亮，檢查結果部分正?；騼H有腦脊液常規(guī)白細胞輕度增高，計數數個至數十個，　　腦脊液生化糖輕度降低、蛋白稍增高。化膿性腦膜炎22例(化腦組)，男12例，女10例；　　年齡1個月～10歲，平均4.3歲；臨床上以發(fā)熱、意識障礙、顱內壓增高、抽搐和腦膜&l

88、t;p>　　刺激征為主要表現(xiàn)；腦電圖異常20例，表現(xiàn)為基本節(jié)律減慢或者陣發(fā)性高波幅慢波增　　多，頭顱CT異常10例，表現(xiàn)為增強后腦膜和腦皮層增強信號，2例重型病例并發(fā)硬膜　　下積液、腦積水等；頭顱MRI異常5例，3例顯示腦溝變淺消失，腦回飽滿，皮層下及　　皮層彌漫性長T1、長T2信號，2例可見硬膜下積液及腦

89、積水。腦脊液外觀渾濁，呈米　　9　　萬方數據　　湯水樣，壓力明顯增高，常規(guī)白細胞計數數百至數千，生化蛋白明顯增高，糖降低。　　結核性腦膜炎16例，男8例，女8例；年齡10個月～13歲，平均5.2歲

90、；臨床表現(xiàn)大多　　先有不規(guī)則發(fā)熱，后出現(xiàn)意識障礙、抽搐、腦膜刺激征及顱高壓表現(xiàn)，常伴有性格改　　變；腦電圖異常14例，表現(xiàn)為陣發(fā)性高波幅慢波增多或者基本節(jié)律減慢，偶有棘-慢　　綜合波、棘波；腦部CT異常9例，表現(xiàn)為腦池密度增高、模糊，基底核陰影增強，腦　　室擴大、腦鈣化形

91、成，腦水腫或局灶性梗死癥；頭顱MRI異常4例，表現(xiàn)為腦實質內　　可見結節(jié)狀信號影，環(huán)形強化1例，均勻明顯強化3例，雙額頂葉腦溝增寬，伴有腦室　　擴大及腦積水。腦脊液壓力增高，外觀呈毛玻璃樣，常規(guī)白細胞分類以單核細胞為主，　　計數數十至數百個，腦脊液生化糖降低、蛋白增高。

92、　1.4對照組：20例患兒為擇期手術行蛛網膜下腔麻醉，其血常規(guī)、生化、腦脊　　液、檢查無異常，除外感染性疾病及神經系統(tǒng)器質性病變,年齡6月~14歲，平均4.5歲；　　男12例,女8例；各組性別、年齡及病程無明顯差異。　　2.主要儀器及試劑<p&g

93、t;　　2.1.主要儀器　　Fingli 高速離心機 LDZ5—2 型——北京醫(yī)用離心機廠　　XLJ-II 型離心沉淀機——………南京第一醫(yī)療器械廠　　SANYO 醫(yī)用低溫冰箱——………日本三洋電機株式會社　　721 型分光光度計——

94、……………上海第三分析儀器廠　　XW-80A 旋渦混合器——…………上海醫(yī)科大學儀器廠　　1000u1、200ul、10u1 微量移液器及玻璃試管，吸頭、EP 管、PP 塑料管等。　　2.2．主要試劑　　2.2.1 硫化氫測定需用試劑

95、　　硫氫化鈉(分析純)——………………………產自美國 sigma 公司　　醋酸鋅、三氯化鐵、三氯醋酸、對苯二胺鹽酸鹽，均為分析純級　　10　　萬方數據

96、——產白天津科密歐試劑公司　　2.2.2　　一氧化氮測定需用試劑　　一氧化氮測定試劑盒由解放軍總醫(yī)院科技開發(fā)中心生產，內含緩沖液(用前用去　　離子水稀釋至 1000ml)、鎘粒、0.1mol／L KNO3 貯存液、去蛋白試劑、活化劑、

97、絡活　　劑、Griess 試劑 A、Griess 試劑 B。　　3．實驗方法　　3.1　　3.1.1　　血清及腦脊

98、液硫化氫(H2S)測定　　血清及腦脊液硫化氫測定原理　　先用血清及腦脊液中的醋酸鋅與硫離子充分反應形成硫化鋅沉淀而固定下來，再　　用對苯二胺鹽酸鹽和三氯化鐵顯色，用分光光度計檢測吸光度，根據硫化氫標準曲線　　計算血清及腦脊液中硫化氫的含量。<

99、p>　　3.1.2　　硫化氫測定標準曲線制作　　以硫氫化鈉配制成濃度為 200umol／L 的溶液，然后按表 1 配制成濃度梯度標準　　液，按照實驗測定硫氫化鈉過程測定各梯度吸光度，依據硫氫化鈉濃度對應吸光度繪　　制標準曲線(見

100、圖 1)。　　NaHS 濃度（umol/L）　　200 umol/LNaHS（ul）　　三蒸水（ul）　　20　　100</b&g

101、t;　　900　　40　　200　　800　　60</

102、b>　　300　　700　　80　　400　　600&

103、lt;/b>　　100　　500　　500　　表 1 硫氫化鈉標準液配制　　11</b

104、>　　萬方數據　　120　　100　　80　　60&l

105、t;/b>　　40　　20　　0　　0　　0.2<

106、;/b>　　0.4　　0.6　　吸光度　　圖 1 H2S 標準曲線　　3.1.3 血清硫化氫測定方法</

107、p>　　H2S測定采用去蛋白法[2]往事先準備好的玻璃試管中加入0.5m1 1％醋酸鋅后加　　入0.1m1血清或腦脊液標本，振蕩搖勻，再先后加入30mmol／L三氯化鐵0.5ml和20mmo1　?。疞對苯二胺鹽酸鹽0.5ml，室溫孵育20min，使之充分顯色。加入10％三氯醋酸lml，

108、　　用蒸餾水補足體積至5m1。離心6000r／min，時間5min，然后吸出上清夜，測上清夜　　在670nm波長處吸光度值，根據標準曲線計算上清液中H2S的含量。　　3. 2 血清及腦脊液一氧化氮(NO)測定　　3.2.1 血清及腦脊液一氧化氮(NO)測定原理　　由于 N

109、O 在生物體內半衰期短，含量低，直接測定十分困難，因而在醫(yī)學研究中　　常用測定 NO 代謝終產物—NO3-、NO2-的間接測定方法。NO 在血清及腦脊液中形成的 NO2-　　很快轉變成 NO3- (一小時內>95％)，因此血清及腦脊液中的 NO2-濃度很低，血清及腦　　-

110、;　　NO 水平。　　3.2.2 一氧化氮測定標準曲線的制作　　以試劑盒中硝酸鉀標準品配制成濃度為 200umol／L 溶液，再按表 2 配制梯度標　　準液，按照 NO 測定方法分別測定吸光度，依據其吸光度與標準液濃度繪制標準曲線&l

111、t;/p>　　(見圖 2)。　　12　　萬方數據　　NO 濃度（umol/L）　　200 umol/L KNO3（ul）</

112、p>　　三蒸水（ul）　　20　　100　　900　　40</b&g

113、t;　　200　　800　　60　　300　　700<

114、/b>　　80　　400　　600　　100　　500

115、　　500　　表 2 NO 標準液的配制　　120　　100　　80</

116、b>　　60　　40　　20　　0　　0</b&

117、gt;　　0.1　　0.2　　0.3　　0.4　　0.5&l

118、t;/b>　　0.6　　吸光度　　圖 2 NO 標準曲線　　3.2.3 一氧化氮測定方法　　取玻璃管，加入 0.75ml 血清或腦脊液和 0.15m

119、l 去蛋白試劑，充分混勻，放置　　5min 后離心 2000 轉／分鐘， 15 分鐘去蛋白．另取試管，按表 3 流程操作．　　13　　萬方數據　　加入成分（ml）</b&g

120、t;　　緩沖液（ml）　　空白管　　1.2　　測定管　　0.

121、8　　標準管　　0.9　　去蛋白血清或腦脊液（ml） —　　0.3　　—<

122、;/b>　　絡合劑（ml）　　—　　0.1　　—　　不同稀釋濃度 KNO

123、3（ml） —　　—　　0.3　　表 3　　鎘粒倒進 500ml 燒杯中，用去離子水沖洗 3 次，用緩沖液沖洗 1 次，濾紙吸干水&l

124、t;p>　　后浸泡在活化劑溶液中攪拌 1-2 分鐘，再用緩沖液沖洗 3 次，用濾紙徹底吸干水分，　　加入管至液面，室溫放置 90min，從中吸出液體 0.4ml 轉移到另一試管，按表 4 流程　　操作：　　加入成分（ml）</

125、p>　　鎘還原空白液（ml）　　鎘還原去蛋白溶液（ml）　　鎘還原 KNO3（ml）　　Griess 試劑 A（ml）　　空白管　　0.4<

126、/b>　　—　　—　　0.4　　測定管　　—</

127、b>　　0.4　　—　　0.4　　標準管　　—<

128、/b>　　—　　0.4　　0.4　　混勻，室溫放置 5 分鐘　　Griess 試劑 B（ml）</p&g

129、t;　　0.4　　0.4　　0.4　　表 4　　混勻，室溫放置 5 分鐘，空白管調零比色，選擇波長

130、 546nm，讀取吸光度。根據　　吸光度、不同稀釋濃度 KNO3 與標準液所作標準曲線，計算樣品硝酸鹽濃度。　　14　　萬方數據　　4.統(tǒng)計學處理</p

131、>　　實驗數據用均值±標準差表示，兩組間比較用 t 檢驗，多組間比較用方差分析(F　　檢驗)，兩兩比較用 q 檢驗，H2S 與 NO 之間的關系采用相關回歸分析。數據經 SPSS　　20.0 統(tǒng)計軟件處理，P<0.05 有統(tǒng)計學意義。　　15</

132、b>　　萬方數據　　結　　果　　1、各組患兒腦脊液中 H2S、NO 水平比較　　四組患兒腦脊液中 H2S 和

133、NO 水平經單因素方差分析，差異均有統(tǒng)計學意義，兩　　組之間再進一步經兩兩比較，患兒腦脊液中 H2S 含量除病腦組與對照組差異沒有統(tǒng)計　　學意義外，其他兩組間均有統(tǒng)計學意義，感染組患兒腦脊液中 H2S 水平表現(xiàn)為化膿性　　腦膜炎組最高、結核性腦膜炎組次之、病毒性腦炎組最低；患兒腦脊液中 NO 含量，</p&

134、gt;　　各兩組間差異均有統(tǒng)計學意義，顱內感染組患兒腦脊液中 NO 水平表現(xiàn)為結核性腦膜　　炎組最高、化膿性腦膜炎組次之、病毒性腦炎組最低。(結果見表 5)　　表 5　　顱內感染患兒腦脊液中 H2S 和 NO 的水平(x±s)

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腦脊液與血清中h2s、no水平對患兒不同病原顱內感染的鑒別意義

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