增強(qiáng)UV-B輻射對(duì)小麥幼苗細(xì)胞周期中肌動(dòng)蛋白的影響.pdf

1、大氣臭氧層變薄導(dǎo)致達(dá)到地面的UV-B輻射增強(qiáng)，增強(qiáng)的UV-B輻射對(duì)植物的生長(zhǎng)發(fā)育、生理生化過程以及整個(gè)地球生態(tài)系統(tǒng)產(chǎn)生了很大的影響。小麥作為世界上總產(chǎn)量第二的糧食作物，研究其對(duì)增強(qiáng)UV-B輻射的響應(yīng)機(jī)制具有重要的意義。
　　 本研究以“ML7113”品種小麥為研究對(duì)象，采用增強(qiáng)UV-B輻射(輻射劑量為10.08KJ·m-2·d-1)處理小麥，以特異性異硫氰酸熒光素標(biāo)記的鬼筆環(huán)肽(A-t-G)和4’，6-二脒基-2-苯基吲哚(DA

2、PI)為探針，利用蔗糖密度梯度離心、流式細(xì)胞術(shù)、激光共聚焦顯微鏡等技術(shù)，分別從細(xì)胞間期及細(xì)胞分裂期兩個(gè)層面，研究了小麥幼苗體細(xì)胞中肌動(dòng)蛋白纖維(F-actin)骨架與染色質(zhì)(體)之間的分布格局與變化，以揭示肌動(dòng)蛋白纖維在小麥體細(xì)胞周期中分布與作用，進(jìn)而探究增強(qiáng)UV-B輻射造成的小麥“分束分裂”細(xì)胞中肌動(dòng)蛋白纖維的作用機(jī)制，為進(jìn)一步完善細(xì)胞分裂的生物學(xué)機(jī)制、闡明細(xì)胞的抗性機(jī)理等提供一定的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。主要的研究結(jié)果如下：
　　 1.經(jīng)

3、SDS-PAGE電泳、Western-blot技術(shù)及Bradford法檢測(cè)分析小麥幼苗中肌動(dòng)蛋白的含量，結(jié)果表明，增強(qiáng)UV-B輻射處理后，小麥幼苗中肌動(dòng)蛋白的含量減少。
　　 2.采用蔗糖密度梯度離心技術(shù)分離得到大量純凈的小麥葉肉細(xì)胞核，經(jīng)流式細(xì)胞術(shù)及激光共聚焦掃描技術(shù)檢測(cè)證明，小麥幼苗細(xì)胞核中存在纖維狀的肌動(dòng)蛋白(F-actin)，且經(jīng)增強(qiáng)UV-B輻射后，小麥葉肉細(xì)胞核內(nèi)F-actin含量升高。
　　 3.通過正交試驗(yàn)

4、，得到酶解分離小麥幼苗葉片原生質(zhì)體的最佳條件：纖維素酶濃度為1.4％、果膠酶濃度0.15％、酶解時(shí)間3.5h、酶解溫度23℃、料液比為1:10。經(jīng)FDA檢測(cè)，酶解10h后的原生質(zhì)體活力依然很高。
　　 4.通過激光共聚焦掃描顯微鏡觀察，增強(qiáng)UV-B輻射處理的小麥幼苗葉肉細(xì)胞原生質(zhì)體存在大量變形現(xiàn)象，其內(nèi)細(xì)胞核結(jié)構(gòu)散亂不完整，細(xì)胞中內(nèi)容物增多，染色體凝集較差，細(xì)胞內(nèi)F-actin斷裂現(xiàn)象嚴(yán)重。
　　 5.對(duì)小麥幼苗根尖伸長(zhǎng)

5、區(qū)的研究表明，增強(qiáng)UV-B輻射處理后，伸長(zhǎng)區(qū)細(xì)胞內(nèi)核仁不明顯，且F-actin出現(xiàn)嚴(yán)重的斷裂現(xiàn)象。
　　 6.通過對(duì)小麥根尖分生區(qū)細(xì)胞周期中染色體與F-actin的進(jìn)一步研究，以染色體的形態(tài)發(fā)展變化及染色體運(yùn)動(dòng)情況為標(biāo)準(zhǔn)，我們將目前已知的細(xì)胞分裂周期進(jìn)一步細(xì)化成10個(gè)階段，分別為：間期前期、間期后期、分裂前期的前期、分裂前期的后期、分裂中期、分裂后期前期、分裂后期中期、分裂后期后期、分裂末期前期、分裂末期后期。
　　 7

6、.研究得到小麥根尖分生區(qū)細(xì)胞在分裂期中F-actin與染色體關(guān)系的模式圖，初步闡明了F-actin在小麥根尖分生區(qū)各個(gè)時(shí)期中的分布及其與染色體之間的相互關(guān)系。即：間期細(xì)胞中F-actin纖維較長(zhǎng)，平行分布于細(xì)胞質(zhì)中，且細(xì)胞核周圍存在“微絲環(huán)”。細(xì)胞進(jìn)入分裂期后，隨著核膜破裂，細(xì)胞中的F-actin斷裂成均勻的片段，此時(shí)染色體填滿整個(gè)細(xì)胞。進(jìn)入分裂中、后期，F(xiàn)-actin片段緊緊圍繞在染色體周圍，并在細(xì)胞的“極部”聚集。此時(shí)出現(xiàn)“微絲缺失

7、帶”。隨后細(xì)胞中的F-actin向“微絲缺失帶”聚集，出現(xiàn)“微絲重現(xiàn)帶”。細(xì)胞進(jìn)入末期后，“微絲重現(xiàn)帶”變寬，細(xì)胞“極部”F-actin消失，細(xì)胞核開始出現(xiàn)。細(xì)胞進(jìn)入末期后，F(xiàn)-actin重新聚集成絲狀，平行分布于細(xì)胞質(zhì)中，細(xì)胞重新進(jìn)入間期。
　　 8.小麥根尖細(xì)胞周期中存在著“微絲缺失帶”和“微絲重現(xiàn)帶”，對(duì)二者出現(xiàn)的位置進(jìn)行分析后，推測(cè)它們與細(xì)胞板的形成有關(guān)。
　　 9.增強(qiáng)UV-B輻射處理后的小麥根尖分生區(qū)間期細(xì)胞