斑馬魚(Danio rerio)重組CD36基因的原核表達及功能研究.pdf

1、CD36是一種跨膜糖蛋白，屬于B族清道夫受體（class B scavenger receptor, SR-B）。研究發(fā)現(xiàn)，CD36在哺乳動物的很多組織和細胞中表達，參與多種生理和病理過程，如免疫調(diào)控、脂肪類食物的味覺感受、細胞粘附、血管再生和肥胖、動脈硬化和心肌病變等。但目前的研究工作主要集中在哺乳動物中，在魚類中的研究還很薄弱。斑馬魚是重要的魚類模式生物。最近，我們對斑馬魚CD36基因的組織分布、胚胎發(fā)育時期的時空表達模式及其在免疫

2、中的作用作了初步研究。本文在我們前期研究的基礎(chǔ)上，對斑馬魚CD36基因進行了原核體外表達，并對其功能進行了進一步研究。
　　首先，我們對斑馬魚CD36基因進行了原核體外表達。利用PCR技術(shù)對斑馬魚CD36基因序列進行了克隆。其cDNA長度為1185 bp，可編碼395個氨基酸的蛋白質(zhì)，分子量為46.8 kDa。將該片段同pET-28a原核表達載體連接，構(gòu)建了重組原核表達載體，轉(zhuǎn)化大腸桿菌并成功進行了誘導(dǎo)表達。重組CD36蛋白的表達

3、部位主要在包涵體中。
　　其次，我們對重組CD36蛋白的免疫功能進行了研究。對重組蛋白CD36進行了溶解、純和透析復(fù)性?？咕钚詸z測發(fā)現(xiàn)它對革蘭氏陰性細菌大腸桿菌和革蘭氏陽性細菌金黃色葡萄球菌均有抑制作用。經(jīng)FITC標記的重組蛋白可以和革蘭氏陰性細菌大腸桿菌和革蘭氏陽性細菌金黃色葡萄球菌均發(fā)生結(jié)合，提示重組蛋白的抑菌機理可能是通過重組蛋白同細菌結(jié)合實現(xiàn)的。
　　最后，我們構(gòu)建了CD36 pCS2-TALEN載體，為利用TAL