脊尾白蝦微衛(wèi)星引物篩選及群體遺傳多樣性分析.pdf

1、采用人工合成的生物素標(biāo)記(AG)15探針及磁珠富集法構(gòu)建了海州灣脊尾白蝦(Exopalaemon carinicauda)基因組微衛(wèi)星富集文庫。將脊尾白蝦基因組DNA經(jīng)HaeⅢ酶切后,收集400～1200bp片段,連接特定接頭,與生物素標(biāo)記(AG)15探針雜交并捕獲含有微衛(wèi)星的DNA片段,然后連接到pMD18-T載體中,構(gòu)建脊尾白蝦微衛(wèi)星富集文庫。隨機(jī)挑取947個克隆,經(jīng)菌落PCR檢驗(yàn),其中667個為陽性克隆。從陽性克隆中隨機(jī)選取184

2、個克隆進(jìn)行測序,有150個克隆含有微衛(wèi)星序列,共獲得199個微衛(wèi)星序列,其中完美型158個(79.4％),非完美型27個(13.6％),復(fù)合型14個(7.0％)。根據(jù)微衛(wèi)星序列,設(shè)計(jì)了119對微衛(wèi)星引物,64對擴(kuò)增出穩(wěn)定的具有特異性的條帶,經(jīng)30個脊尾白蝦個體進(jìn)行多樣性評價后,有26個位點(diǎn)表現(xiàn)出多態(tài)性。26個微衛(wèi)星位點(diǎn)獲得的等位基因數(shù)從3～16個不等,平均每個位點(diǎn)擴(kuò)增得到6.5個等位基因。觀測雜合度(Ho)、期望雜合度(He)及多態(tài)性信

3、息含量值(PIC)的范圍分別為0.111～0.929、0.246～0.932、0.231～0.909。本研究開發(fā)的微衛(wèi)星位點(diǎn)將為脊尾白蝦種群多樣性研究、家系識別和種質(zhì)鑒定提供有效的工具。
　　采用人工合成的生物素標(biāo)記(AG)15和(AC)15探針及磁珠富集法構(gòu)建了萊州灣脊尾白蝦(Exopalaemon carinicauda)基因組微衛(wèi)星富集文庫。將脊尾白蝦基因組DNA經(jīng)HaeⅢ酶切后,收集400～1200bp片段,連接特定接頭,

4、與生物素標(biāo)記(AG)15和(AC)15探針雜交并捕獲含有微衛(wèi)星的DNA片段,然后連接到pMD18-T載體中,構(gòu)建萊州灣脊尾白蝦微衛(wèi)星富集文庫。根據(jù)微衛(wèi)星序列,設(shè)計(jì)微衛(wèi)星引物,經(jīng)30個脊尾白蝦個體進(jìn)行多樣性評價后,有30個位點(diǎn)表現(xiàn)出多態(tài)性。30個微衛(wèi)星位點(diǎn)獲得的等位基因數(shù)從2～14個不等。觀測雜合度(Ho)、期望雜合度(He)及多態(tài)性信息含量值(PIC)的范圍分別為0.2299～0.9228、0.1000～0.8000、0.2002～0.

5、8939。本研究開發(fā)的微衛(wèi)星位點(diǎn)將為萊州灣脊尾白蝦種群多樣性和種群結(jié)構(gòu)研究提供基礎(chǔ)的數(shù)據(jù)。
　　利用12對微衛(wèi)星標(biāo)記分析了萊州灣(LZ)、海州灣(HZ)、象山(XS)脊尾白蝦野生群體的遺傳多樣性。12個位點(diǎn)在3個群體中均表現(xiàn)出高度的多態(tài)性。12個微衛(wèi)星位點(diǎn)共得到115個等位基因,各個位點(diǎn)的等位基因數(shù)介于6-14之間,平均每個位點(diǎn)上的等位基因數(shù)為9.5833個;各個位點(diǎn)的平均期望雜合度(He)、平均觀測雜合度(Ho)、平均多態(tài)信息含