馬尾松胚性愈傷組織誘導與增殖研究.pdf

1、馬尾松(Pinus massoniana)是我國南方分布面積最大的造林樹種之一，具有用材、采脂、造紙等經(jīng)濟用途。然而，馬尾松的良種繁育技術(shù)相對滯后，因此制約著馬尾松良種的廣泛應用。本研究以馬尾松不同采種時間的未成熟種子為材料，探討采種時間、母樹基因型、培養(yǎng)基類型、激素濃度、蔗糖濃度等對胚性愈傷組織誘導的影響，并進一步研究胚性愈傷組織在增殖階段的增殖倍數(shù)以及胚性愈傷組織的形態(tài)變化和細胞變化。旨在為后期進行體胚成熟提供大量材料和理論指導，為

2、建立高效穩(wěn)定的馬尾松體細胞胚胎發(fā)生技術(shù)奠定扎實的基礎(chǔ)和提供一定的技術(shù)指導。本文主要的研究內(nèi)容與結(jié)果如下：
　　 1.馬尾松合子胚在湖南的發(fā)育過程與其它松屬樹種的合子胚發(fā)育過程基本一致。5月下旬至6月下旬的馬尾松種子幼胚中合子胚還未形成雛形，還以液態(tài)狀存留在馬尾松種子幼胚的胚乳中，此時的種子胚乳與種皮很難分離；7月份的馬尾松種子幼胚中合子胚已漸成形，胚頭開始膨大，胚柄逐漸開始退化，胚軸伸長，合子胚處于子葉前期，此時胚乳與種皮很容易

3、分離，8月份的馬尾松種子幼胚合子胚已趨于成熟，胚軸伸長，胚柄退化，胚頭頂端出現(xiàn)分生組織，胚乳已固化，種皮與胚乳較易分開，合子胚逐漸成熟。
　　 2.馬尾松胚性愈傷組織誘導的最佳采種時間為7月25日，胚性愈傷誘導率最高可達到15％，而此時的合子胚處在子葉前期。5月下旬至6月下旬采集的外植體接種后誘導產(chǎn)生的多為非胚性愈傷組織，外植體接種后很容易褐化，褐化率最高，達到了85％；7月份采集的外植體接種后較易誘導產(chǎn)生胚性愈傷組織，胚性愈傷

4、誘導率最高達到15％，外植體褐化數(shù)量較少；8月份采集的外植體體接種后誘導產(chǎn)生少量的胚性愈傷組織，較多的非胚性愈傷組織，大量的外植體接種后不發(fā)生啟動反應。對不同采種期的胚性愈傷組織誘導率進行單因素方差分析，發(fā)現(xiàn)采種時間(合子胚的發(fā)育階段)對胚性愈傷誘導率和非胚性愈傷誘導率均呈顯著性影響。
　　 3.不同母樹基因型的胚性愈傷組織誘導率有差異，但差異不顯著。7月25日采集的3個母樹基因型的外植體接種后，胚性愈傷誘導率由高到低分別為A樹

5、15％，B樹6.7％，C樹3.3％。對不同母樹基因型的胚性愈傷組織誘導率進行單因素方差分析，結(jié)果顯示，母樹基因型對胚性愈傷誘導率影響不顯著，但母樹基因型對非胚性愈傷組織誘導率成顯著影響。
　　 4.誘導馬尾松胚性愈傷組織的最佳培養(yǎng)基為LP。實驗所用的三種培養(yǎng)基，其誘導馬尾松胚性愈傷組織的誘導率分別為DCR10％，LPGR13.3％，LM1.7％。LP培養(yǎng)基與DCR培養(yǎng)基對胚性愈傷組織誘導率相差不大，但在后期的增殖培養(yǎng)中DCR培養(yǎng)

6、基上誘導產(chǎn)生的胚性愈傷組織在增殖過程中水化現(xiàn)象嚴重，胚性愈傷組織增殖倍數(shù)小，2次繼代后基本死亡，LP培養(yǎng)基上誘導產(chǎn)生的胚性愈傷組織在后期的增殖過程中增殖倍數(shù)和愈傷狀態(tài)以及繼代次數(shù)均高于DCR培養(yǎng)基。LM培養(yǎng)基上誘導產(chǎn)生極少量的胚性愈傷組織，在后期增殖過程中死亡。單因素方差分析顯示，培養(yǎng)基類型對誘導胚性愈傷組織有顯著的影響。
　　 5.誘導馬尾松胚性愈傷組織的最佳激素組合為：1.5mg/L2，4-D+1.0 mg/L6-BA該激素

7、濃度的處理，胚性愈傷組織誘導率最高可達8.33％：蔗糖對胚性愈傷組織的誘導影響不顯著，但是在含有高濃度蔗糖的培養(yǎng)基上誘導產(chǎn)生的胚性愈傷組織在后期的增殖培養(yǎng)中增殖倍數(shù)較大，且增殖能力很強。不同激素水平下誘導出的胚性愈傷組織在后期的增殖過程中增殖倍數(shù)不同和愈傷質(zhì)量有顯著差異；同一激素水平下誘導產(chǎn)生的不同細胞系的胚性愈傷組織在后期的增殖過程中增殖倍數(shù)和愈傷質(zhì)量有亦較大的差異，但差異不顯著。
　　 6.本文還對誘導產(chǎn)生的兩類不同的愈傷組