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文檔簡介
1、白細(xì)胞介素-1受體相關(guān)激酶(Interleukin-1 Receptor-Associated Kinase, IRAK)是參與Toll樣受體(Toll like receptor, TLR)與白細(xì)胞介素1(Interleukin-1, IL-1)受體細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)的關(guān)鍵因子。在哺乳動(dòng)物中,IRAK家族的四個(gè)成員 IRAK-1、IRAK-2、IRAK-3和IRAK-4都參與先天免疫反應(yīng)。其中,IRAK-4是IRAK家族中最重要的成員,負(fù)責(zé)
2、整個(gè)IL-1/TLR信號(hào)通路的開關(guān),其功能缺失與多種免疫疾病相關(guān),但是在低等動(dòng)物中對(duì)IRAK-4及其信號(hào)通路的研究十分缺乏。
本研究成功克隆了草魚IRAK-4全長cDNA,該序列編碼473個(gè)氨基酸序列。多序列比對(duì)發(fā)現(xiàn),草魚IRAK-4的氨基酸序列與其他物種相比比較保守。生物信息學(xué)分析結(jié)果顯示,草魚IRAK-4具備完整的死亡結(jié)構(gòu)域(Death Domain,DD)與激酶結(jié)構(gòu)域(Kinase Domain,KD),3D結(jié)構(gòu)模型也為
3、其具備生物學(xué)功能提供依據(jù)。
組織分布研究表明, IRAK-4在草魚多種組織中均有表達(dá),表達(dá)水平相差不大。在草魚頭腎白細(xì)胞(Headkidny Leukocyte, HKL)中,IRAK-4的表達(dá)水平能被IL-1?所誘導(dǎo)。同時(shí),該誘導(dǎo)表達(dá)能夠被免疫抑制因子IL-10所抑制。嗜水氣單胞菌感染草魚的體內(nèi)模型中,草魚IRAK-4與IL-1?的表達(dá)都在24小時(shí)內(nèi)被顯著上調(diào),隨后消失。二者被誘導(dǎo)表達(dá)的時(shí)間點(diǎn)上有同步性。
本研究還
4、成功構(gòu)建了草魚IRAK-4及其功能缺失片段的過表達(dá)載體,并成功在草魚腎細(xì)胞系CIK中過表達(dá)。過表達(dá)研究發(fā)現(xiàn),與哺乳動(dòng)物中相反,CIK中過表達(dá)草魚IRAK-4可抑制核因子-κB(Neuclear Factor-κB, NF-κB)的活性,并且可抑制本底及IL-1?對(duì)自身mRNA的上調(diào),而這些抑制作用依賴于IRAK-4完整的功能域,因?yàn)檫@種抑制功能是IRAK-4缺失片段所不具備的。該抑制作用的作用機(jī)理可能有:第一,魚類IRAK-4缺乏自身磷
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