抗A型口蹄疫病毒和O型口蹄疫病毒重組雙價多肽疫苗研究.pdf

1、Y臣繁0_‘I。卜∞。。：’十塵代fIl5：10246’‘：；j：200366後旦大學毒一；1—t，持。l二，_‘：捌片段為了增加免疫原性，將兩個主要抗原決定簇組成141～160(20AA)一2l～40(20AA)一141～160(20AA)串聯重復結構，同樣A型FMDV抗原肽由A型FMDVVPI蛋白中21～40位及138～160位氨基酸殘基兩個肽段組成，其結構為138～160(23AA)21～40(20AA)一138～160(23AA

2、)。因為IgG的Fc區(qū)能與抗原提呈細胞(APC)表面上的Fc受體結合?？蓪！缘乇徊煌珹PC所攝取，因此為了提高抗O型FMDV和A型FMDV雙價基因工程多肽疫苗的免疫效果，我們用牛IgG重鏈恒定區(qū)作為載體蛋白，在其N端連上O型FMDV抗原決定簇串聯片段，C端連上A型FMDV抗原決定簇串聯片段，并將其克隆到表達質粒中，構建表達質粒pTH～OAl。另外考慮到多肽抗原的免疫原性與抗原決定簇的數量正相關，我們構建一個全部由抗原決定簇組成的雙價基

3、因工程多肽疫苗，構建表達質粒pTHOA2將這兩個表達質粒分別轉化大腸桿菌，經誘導表達出兩個融合蛋白，分別檢測它們誘發(fā)豚鼠產生免疫應答的狀況，并通過病毒攻擊實驗檢測其對豚鼠的免疫保護效果。試驗結果表明上述二種重組質粒編碼的抗原蛋白都能誘導中和抗體的產生和激發(fā)細胞免疫，進一步用FMDV攻毒實驗證明質粒pTHOAI表達的抗原蛋白對O型病毒攻擊的保護率為70％，劉。A型病毒攻擊的保護率為57％，而質粒pTH—OA2表達的抗原蛋白對O型病毒攻擊的

4、保護率為856％，對A型病毒攻擊的保護率為70％。第二章抗口蹄疫病毒DNA疫苗的研究雖然DNA疫苗能誘導機體產生較強的細胞免疫應答，但通常只能誘導較低的體液免疫應答，影響其免疫效果。主要原因是因為誘導機體產生抗體反應需要在體內有足量的抗原蛋白，而DNA疫苗免疫時體內只有少量的細胞能被DNA疫苗轉染并表達抗原蛋白，因此誘導產生的特異性抗體滴度較低。在體內抗原蛋白是隨機地被抗原提呈細胞提呈，如將抗原蛋白靶向引導至抗原提里細胞表面可以大幅度提