28615.書虱谷胱甘肽s轉移酶的純化及生化毒理學特性研究

1、西南大學博士學位論文書虱谷胱甘肽S轉移酶的純化及生化毒理學特性研究姓名：豆威申請學位級別：博士專業(yè)：農業(yè)昆蟲與害蟲防治指導教師：王進軍20090501西南大學博士學位論文1t_m蔓皇曼量曼|蔓曼皇曼E曼曼量量蔓皇量雖曼量量量曼曼量■|詈舅|量量囊量曼量置■|量魯皇皇皇曼曼曼曼量曼量量鼉曼皇曼曼皇皇曼曼曼量曼曼量量量皇置●■—量一GSTsN端氨基酸序列高度一致，表明純化獲得的GSTs屬于昆蟲Sigma類。嗜卷書虱3個品系GSTs的純化倍數(shù)

2、在6291倍之間，回收率介于2741％。利用微量滴度酶標板法對純化后的GSTs的生化特性分析表明，與SS品系相比，DDVPR和PH3R品系的GSTs活性顯著提高(P005)。進一步的動力學比較研究發(fā)現(xiàn)，以CDNB為底物時，DDVPR品系的‰值最高；而以GSH為底物時，兩抗性品系‰值較低，說明DDVP和PH3的脅迫選擇造成GSTs對內源性化合物GSH獲得了較高的親和能力；對‰，而言，兩抗性品系的‰。值均高于敏感品系，說明其催化能力提高。嗜

3、卷書虱3個品系GSTs活力隨pH／篷i變化的趨勢大體相同，其ss品系GSTs的展適pH范圍較廣，介于pH70pH802_問，而兩抗性品系的最適范圍介于pH70pH75之間。酶促反應最適溫度研究發(fā)現(xiàn)，SS和PH3R品系在35。C時GSTs活力最高，而DDVPR品系則在40。C時GSTs的活力最高。殺蟲劑對嗜卷書虱3個品系GSTs的離體作用研究表明，供試的殺蟲劑中丁硫克百威對嗜卷書虱3個品系的GSTs的抑制作用明顯，3品系間相比較PH3R品

4、系GSTs對丁硫克百威的抑制作用敏感度低，抑制中濃度場分別為ss和DDVPR品系的39和47倍。毒死蜱和高效氯氰菊酯對嗜卷書虱的GSTs僅有部分的抑制作用，毒死蜱在低濃度時還表現(xiàn)為一定的激活作用。利尿酸、姜黃素和四溴磺酚鈉對嗜卷書虱純化后的GSTs均有顯著的離體抑制作用。其中，姜黃素的抑制作用最強，其‰達納摩爾數(shù)量級。綜合分析，SS品系與兩抗性品系相比對上述抑制劑更為敏感，兩抗性品系GSTs對各抑制劑的敏感性存在一定的差異。2嗜卷書虱不

5、同發(fā)育階段GSB的純化及生化毒理學特性解析采用GlutathioneSepharose413親和層析法純化了嗜卷書虱3個發(fā)育階段(12齡低齡若蟲、34齡高齡若蟲和成蟲)的GSTs。結果表明，低齡若蟲GSTs的純化倍數(shù)最高，達102倍，但回收率僅為28％；高齡若蟲GSTs的純化倍數(shù)最低，僅為63倍，但回收率高達61％；成蟲GSTs的純化倍數(shù)介于低齡和高齡若蟲之間，其GSTs的比活力最高，且顯著高于低齡若蟲(P005)。以GSH和CDNB為

6、底物的動力學特性分析發(fā)現(xiàn)，低齡若蟲GSTs的墨值最低，而成蟲GS儆于兩底物均表現(xiàn)最高的催化反應速度‰。，表明成蟲期GSTs對底物的催化能力顯著高于若蟲期。毒死蜱對嗜卷書虱不發(fā)育階段GSTs純化后的離體作用結果表明，該藥劑對GSTs有一定的抑制作用，但在低濃度時表現(xiàn)為一定的激活作用，隨著濃度的升高，抑制作用逐漸顯現(xiàn)。在測試的5個濃度下，毒死蜱對GSTs的最高抑制率僅為39％。5種典型化合物(利尿酸、姜黃素、雙硫侖、馬來酸二乙酯和四溴磺酚鈉