反義ACC合酶轉(zhuǎn)基因?qū)λ{(lán)豬耳生長(zhǎng)發(fā)育的影響.pdf

1、乙烯是五大類植物激素中結(jié)構(gòu)最為簡(jiǎn)單的唯一的氣態(tài)激素.它參與了從種子萌發(fā)到成熟衰老的一系列生命過(guò)程的調(diào)節(jié).由于乙烯與植物的花、果的成熟和衰老有密切關(guān)系,控制乙烯的生物合成就可延緩其衰老,因而有重要的商業(yè)價(jià)值.ACC合酶(ACS)是高等植物乙烯生物合成途徑中的限速酶,它在植物組織內(nèi)的活性大小往往決定著乙烯產(chǎn)生的速率.先后有人利用反義基因技術(shù)進(jìn)行了抑制乙烯生物合成研究工作.藍(lán)豬耳是一種觀賞花卉,同時(shí)其具有獨(dú)特的胚囊發(fā)育模式,在其發(fā)育的四核期,

2、胚囊從珠孔端伸出,當(dāng)胚囊完全成熟時(shí),助細(xì)胞、卵細(xì)胞和大部分中央細(xì)胞均暴露于胚珠組織之外,是研究被子植物胚囊發(fā)育和受精的模式植物.該研究探索和完善了藍(lán)豬耳遺傳轉(zhuǎn)化條件,并將反義ACC合酶基因轉(zhuǎn)化藍(lán)豬耳,以期獲得延長(zhǎng)花壽命,和有較高抗性的轉(zhuǎn)基因藍(lán)豬耳植株.研究結(jié)果表明:(1)篩選藍(lán)豬耳轉(zhuǎn)化芽的最適卡那霉素濃度為400mg/L.OD<,600>為0.1的菌液濃度菌液浸染葉盤(pán)10~20min,固體共培養(yǎng)基(含20μmol/L乙酰丁香酮)上23℃

3、共培養(yǎng)7~8d可獲得理想的轉(zhuǎn)化效率,轉(zhuǎn)化芽誘導(dǎo)率為27.2﹪;16 h光照,8h黑暗是較理想的共培養(yǎng)光周期;莖段是較好的轉(zhuǎn)化受體.在該實(shí)驗(yàn)中最高轉(zhuǎn)化率為24.1﹪.轉(zhuǎn)化植株從浸染起8-10周可以開(kāi)花,甚至在培養(yǎng)瓶中即可完成其生活史.這個(gè)優(yōu)良的轉(zhuǎn)化系統(tǒng)為應(yīng)用基因工程手段研究花發(fā)育和雙受精機(jī)制奠定基礎(chǔ).(2)反義ACS轉(zhuǎn)基因藍(lán)豬耳與野生型的藍(lán)豬耳相比較,乙烯的生成速率顯著下降;葉片葉綠素的含量提高,是野生型的1.15倍;花開(kāi)的更多,花的壽命