辣椒抗疫病相關(guān)基因的分析及QTL定位.pdf

1、中文摘要辣椒疫病，是辣椒上的一種毀滅性病害，除了引起大面積死秧外，還可造成葉片枯萎、果實(shí)腐爛、莖桿出現(xiàn)壞死斑等多種癥狀，成為影晌我國辣椒生產(chǎn)的主要障礙a由于辣椒疫病的病原菌能在土壤中長(zhǎng)期存活，并且適宜于辣椒生長(zhǎng)的溫濕度也非常適合于疫霉菌的生長(zhǎng)和繁殖，因此辣椒疫病常暴發(fā)流行。另外辣椒疫病的病原菌易發(fā)生變異，導(dǎo)致耐(抗)藥菌株的產(chǎn)生，藥劑防治的效果也不理想，對(duì)辣椒疫病的防治措施中最重要的一項(xiàng)工作就是選育抗病品種。多數(shù)學(xué)者認(rèn)為辣椒對(duì)疫病沒有免

2、疫品種，對(duì)疫病的抗性遺傳規(guī)律也相當(dāng)復(fù)雜，是由多基因所控制的數(shù)量性狀。因此，抗疫病相關(guān)基因的標(biāo)記、定位，是辣椒分子標(biāo)記輔助選育抗病品種的關(guān)鍵步驟。本研究以國內(nèi)的抗疫病品種931001710和感疫病品種茄門為主要研究材料，以分析辣椒抗疫病相關(guān)基因?yàn)橹骶€，通過抗病基因保守區(qū)域設(shè)計(jì)簡(jiǎn)并引物進(jìn)行PCR、mRNA差異顯示技術(shù)，以及利用AFLP分子標(biāo)記技術(shù)構(gòu)建分子連鎖圖譜，從組成型、誘導(dǎo)型和QTL定位等多角度研究辣椒抗疫病的相關(guān)基因，獲得如下主要結(jié)果

3、：1根據(jù)比較離體葉片接種法、切莖接種法、游動(dòng)孢子灌根接種法，這3種接種方法在931001710、931001l、perennial、SCM334、茄門、伏地尖椒、燈籠椒、YoloWonder等8個(gè)辣椒品種(品系)上的抗病性反應(yīng)，發(fā)現(xiàn)這3種接種方法均可用于辣椒品種抗疫病性狀的鑒定，可以根據(jù)需要選擇適宜的接種方法，并且93100171—0的抗病性最強(qiáng)，9310011、perennial、SCM334為高抗品種，燈籠椒為中抗品種，茄門、伏地尖

4、椒、YoloWonder則為感病品種。2以抗病基因的保守區(qū)域?yàn)榛A(chǔ)設(shè)計(jì)簡(jiǎn)并引物，對(duì)931001710、9310011、perennial、SCM334、茄門、伏地尖椒、燈籠椒、YoloWonder、CV98等9個(gè)辣椒品種(品系)的基因組DNA進(jìn)行PCR擴(kuò)增，分析辣椒組成型抗疫病相關(guān)基因。經(jīng)測(cè)序分析，發(fā)現(xiàn)有5個(gè)抗病基因同源序列(ROA)的序列(B41、B43、B54、B61、B93)的最長(zhǎng)ORF編碼150個(gè)氨基酸以上，只有4個(gè)序列(B51

5、3、B64、C22、C36)的最長(zhǎng)ORF編碼80個(gè)氨基酸以下，其余序列的最長(zhǎng)ORF編碼的氨基酸介于80～150個(gè)之間。將所有的序列發(fā)送到OenBank，均被收錄，基因庫登記號(hào)為AYl25911、AF492473、AF513548、AF5l3549、AF525124一AF525l53。所得擴(kuò)增片段的核苷酸序IAbstractPhytophthorablightcausedbyPhytophthoracapsiciLisorieofthem

6、osteconomicallydestructivesoilbornediseasesofpepper(CapsicumannuumL)throughouttheworldandcanbealimitingfactorforpepperproductionintropicalareaswithhotandhumidclimatesSymptomsassociatedwiththediseaseincludedamping—offfrui

7、trot，foliarblight，rootandcrownrotandstemlesionThepathogencansurviveinsoilforalongtimeThetemperatureandhumiditysuitableforthepeppergrowthisalsoforthepathogenicfungusTheuseofresistantcultivarsisthemostpromisingmethodtocont

8、rolthedisease，becausethepathogeniseasytocounteracttheactivesiteofcurrentlyusedfungicidesHowever，mostscientistsbelievethatthereisnopeppervarietyimmuneto尸hytophthoracapsiciInheritanceoftheresistance，aquantitativetrait，isve

9、rycomplexandcontrolledbypolygenesTheattainmentofpeppercultivarsresistanttoPhytophthoracapsiciisdifficultbecauseofthepolygenicnatureofthistraitItisanobstacletoearmarkandmaptherelatedresistantgenetoPhytophthoracapsiciinpep

10、performolecularmarkerassistedselectionQiemen，anativesusceptiblesweetpepperlines，and93一1001710，anativeresistantpungentlinewereusedasmainmaterialsinthisstudyWeanalyzedconstitutionalresistancegenesusingPCRapproachwithdegene

11、rateprimersdesignedfromconservedmotifsfoundinclonedresistantgenesandinducibleresistancegenesbymRNAdifferentialdisplaytechnique，andmappedquantitativetraitloci(QTL)basedonAFLPtechnique—constructedgeneticlinkagemapThemainre

12、sultsareasfollows：IThreedifferentPhytophthorablightinoculationmethodswerecomparedoneightpeppervarieties／nvitroinoculationofleavescanscreenmanyvarietiesatshorttimeinroomwithoutdamagetoplantsStemcuttinginoculationiseasilye

13、xercisableandthelengthofnecroticpartiscanmeasurableZoosporeinoculationofrootsimulatesnatureinfection，reflectingthetrueresistance，buttheoperationismorecomplicatedAllthree—inoculationmethodscanbeusedtoidentifypepperresista