一株高產漆酶靈芝菌的選育、發(fā)酵條件及酶學性質研究.pdf

1、本文對高產漆酶靈芝（Ganoderma lucidum）菌株的分離篩選、原生質體誘變育種、突變株發(fā)酵條件優(yōu)化、漆酶的分離純化及酶學性質等進行了較為系統的研究，為利用靈芝生產漆酶打下一定的基礎。 對從自然界采集的11個樣本和購買的7株白腐擔子菌進行產漆酶能力檢測，從中篩選到1株高產漆酶菌株—靈芝JR（G. Lucidum JR），培養(yǎng)8d酶活達97.01U/mL。 以靈芝JR為出發(fā)菌株，制備原生質體并進行紫外誘變。原生質體

2、制備和再生的最佳條件是：用0.6mol/L的蔗糖作為穩(wěn)滲劑，4﹪(w/v)的溶壁酶與2﹪(w/v)的蝸牛酶等體積混合，酶解生長48h的菌絲，酶解溫度30℃，pH6.0，酶解1h。用愈創(chuàng)木酚作為初篩試劑，紫外照射后的再生菌落與出發(fā)菌株比較，篩選到21株酶活較高的突變株。經過液體發(fā)酵，篩選到1株酶活較高、發(fā)酵時間較短的突變株JR3010，它是用30W的紫外燈距離40cm照射30s得到的，其酶活達185.08U/mL，比出發(fā)菌酶活提高了1.9

3、1倍；發(fā)酵時間為5d，縮短了3d。 研究突變株JR3010的生長及產酶條件，獲得酶活最大的培養(yǎng)基組成是：葡萄糖25g/L，大豆蛋白粉10g/L ，KH2PO4 3g/L，MgSO4?7H2O 1.5g/L，VB10.01g/L，最佳初始pH5.0，培養(yǎng)溫度28℃，裝液量60mL/250mL三角瓶，培養(yǎng)5d酶活達到439.39U/mL，比培養(yǎng)基優(yōu)化前提高了2.37倍。通過研究金屬離子、表面活性劑和底物類似物對菌株產漆酶的影響，發(fā)現

4、低濃度的Cu2+、Mn2+、Fe2+對其分泌漆酶有促進作用，濃度高時不僅抑制漆酶分泌，而且抑制菌絲生長；十二烷基磺酸鈉（SDS）抑制菌絲生長和漆酶分泌，吐溫80對酶的分泌有促進作用；愈創(chuàng)木酚、沒食子酸和木質素在低濃度時都能促進漆酶分泌。 通過誘變和培養(yǎng)基優(yōu)化使靈芝JR漆酶活力共提高4.53倍，發(fā)酵周期縮短了3d。 電泳分析發(fā)現，JR3010在優(yōu)化的培養(yǎng)基中培養(yǎng)只分泌一種漆酶。發(fā)酵液經透析濃縮、DEAE-纖維素柱層析，比活